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干貨│基因編輯探秘系列之在動(dòng)植物育種領(lǐng)域的應(yīng)用

2024-9-2  閱讀(176)

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2024年5月29日,美國(guó)農(nóng)業(yè)部宣布蘇州齊禾生科生物科技有限公司研發(fā)的基因編輯高油酸大豆P16獲得監(jiān)管豁免。這標(biāo)志著中國(guó)在美國(guó)市場(chǎng)成功獲得基因編輯產(chǎn)品的監(jiān)管豁免,展示了中國(guó)在生物技術(shù)領(lǐng)域的競(jìng)爭(zhēng)力和基因編輯技術(shù)在農(nóng)業(yè)育種方面的巨大潛力。齊禾生科通過對(duì)大豆內(nèi)源脂肪酸脫氫酶基因進(jìn)行精準(zhǔn)編輯,成功培育出高油酸大豆P16。這一突破性成果不僅優(yōu)化了大豆的油脂組成,使大豆種子中的油酸含量提升至80%以上,還可能對(duì)提升其商業(yè)價(jià)值和市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力產(chǎn)生積極影響。

 

CRISPR基因編輯技術(shù),作為繼野生馴化、雜交和轉(zhuǎn)基因之后的第四代育種技術(shù),標(biāo)志著4.0育種時(shí)代的來臨。這項(xiàng)技術(shù)在改良重要經(jīng)濟(jì)物種性狀方面展現(xiàn)出了巨大的潛力,本文將從植物和動(dòng)物育種兩個(gè)方向?yàn)榇蠹以敿?xì)介紹CRISPR技術(shù)的應(yīng)用。


 

 

植物基因編輯育種

 

在植物育種領(lǐng)域,農(nóng)作物作為基因編輯技術(shù)的明星對(duì)象,已經(jīng)取得了令人矚目的成就。諸如糯玉米、高油酸大豆、抗褐變馬鈴薯、高GABA番茄、抗褐變蘑菇、抗除草劑水稻和抗除草劑玉米等基因編輯產(chǎn)品,在美國(guó)、日本等國(guó)家的市場(chǎng)上熠熠生輝,充分展現(xiàn)了基因編輯技術(shù)的巨大潛力。

 

玉米,這種重要的糧食和飼料作物,其關(guān)鍵性狀的優(yōu)化和育種技術(shù)的發(fā)展具有深遠(yuǎn)的意義。在這方面,CRISPR技術(shù)如同一把神奇的鑰匙,已廣泛應(yīng)用于玉米的品質(zhì)改良。它涉及多個(gè)方面,包括提升產(chǎn)量(例如通過減小葉夾角以增加種植密度,進(jìn)而提高行和籽粒產(chǎn)量)、改善食用品質(zhì)(如培育出糯玉米和甜玉米品種)、增強(qiáng)抗逆性(例如提升耐旱能力和抗除草劑能力),以及調(diào)控開花時(shí)間(在長(zhǎng)日照條件下促使更早開花)等。接下來,小編將以玉米為例,為大家詳細(xì)介紹基于CRISPR技術(shù)的植物育種流程。

 

植物基因編輯的過程一般可分為六個(gè)步驟:

 
01
 

設(shè)計(jì)階段

依據(jù)目標(biāo)基因序列,精確設(shè)計(jì)相應(yīng)的核酸酶和gRNA(向?qū)NA)。這一步驟關(guān)鍵在于確保所設(shè)計(jì)的gRNA能夠特異性識(shí)別并引導(dǎo)核酸酶至靶基因位點(diǎn),以實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)編輯。
02
 
構(gòu)建階段
構(gòu)建適用于基因編輯的元件。這包括質(zhì)粒載體形式、mRNA形式或RNP(核糖核蛋白復(fù)合體)形式。選擇合適的形式取決于實(shí)驗(yàn)的具體要求和細(xì)胞類型。
03
 
驗(yàn)證階段
在將構(gòu)建的編輯工具轉(zhuǎn)入目標(biāo)細(xì)胞前,需通過原生質(zhì)體測(cè)試以驗(yàn)證核酸酶的切割活性。利用PCR(聚合酶鏈反應(yīng))、測(cè)序等技術(shù)來確認(rèn)核酸酶的切割效率和精確性。
04
 
遞送階段
將基因組編輯試劑送入植物細(xì)胞。在植物中,CRISPR/Cas系統(tǒng)的遞送通常采用DNA形式,通過基因槍法或農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化,將包含編輯系統(tǒng)的元件通過T-DNA形式插入至植物基因組。對(duì)于mRNA和RNP形式,一般通過原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化或基因槍法實(shí)現(xiàn)遞送。
05
 
再生階段
通過組織培養(yǎng)技術(shù),將經(jīng)過基因組編輯的細(xì)胞再生成完整植株。這一步驟是實(shí)現(xiàn)植物基因編輯應(yīng)用的關(guān)鍵。
06
 
篩選與分型階段
對(duì)再生的植株進(jìn)行篩選和基因分型,以確認(rèn)基因組編輯是否成功,并識(shí)別具有預(yù)期基因型的植株。
07
 
表型觀察階段
對(duì)編輯后的植株進(jìn)行培養(yǎng),并進(jìn)行表型觀察分析。這一步驟有助于評(píng)估基因編輯對(duì)植物性狀的影響,從而驗(yàn)證基因功能和進(jìn)行后續(xù)應(yīng)用研究。

 

圖1. 基于CRISPR/Cas9系統(tǒng)的玉米基因組編輯技術(shù)流程[2]

 

與在植物育種領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用相呼應(yīng),基因編輯技術(shù)在動(dòng)物育種領(lǐng)域同樣展現(xiàn)出了其廣泛的適用性和潛力。

 

 

動(dòng)物基因編輯育種

 

基因編輯技術(shù)在動(dòng)物育種領(lǐng)域的應(yīng)用范圍極為廣泛。在改良生產(chǎn)性能方面,通過編輯動(dòng)物基因組,改良畜禽經(jīng)濟(jì)性狀,比如加快生長(zhǎng)速度,提高飼料利用率等;在改善肉質(zhì)方面,基因編輯方法既可以降低動(dòng)物脂肪量,還能夠調(diào)整其肌肉組織的構(gòu)成,以生產(chǎn)更符合市場(chǎng)和消費(fèi)者需求的肉類產(chǎn)品;在增強(qiáng)家畜抗病能力方面,通過基因編輯開發(fā)出具備特定疾病抗性的新品種,能顯著提高動(dòng)物種群的基因適應(yīng)性,減少養(yǎng)殖業(yè)中抗生素的使用量。這一舉措不僅有助于保障人類健康,同時(shí)也是推動(dòng)環(huán)境可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略的關(guān)鍵因素[3]。下面,以基因編輯豬為例,我們將具體闡釋動(dòng)物基因編輯的操作流程,揭示這項(xiàng)先進(jìn)技術(shù)如何在現(xiàn)代畜牧業(yè)中發(fā)揮作用。

 

動(dòng)物基因編輯的過程一般可分為六個(gè)步驟:

 
01
 

設(shè)計(jì)階段

根據(jù)目標(biāo)基因序列,精確地設(shè)計(jì)出相應(yīng)的核酸酶和gRNA(向?qū)NA)。
02
 
構(gòu)建階段
根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮桶屑?xì)胞類型,選擇合適的形式構(gòu)建基因編輯組件,可能包括質(zhì)粒載體、mRNA或RNP(核糖核蛋白復(fù)合體)等形式。
03
 
切割活性驗(yàn)證階段
在體外環(huán)境下,運(yùn)用PCR、測(cè)序等分子生物學(xué)技術(shù)檢驗(yàn)gRNA的切割效率,保證其能夠高效精準(zhǔn)地剪切目標(biāo)基因。
04
 
轉(zhuǎn)染或注射階段
應(yīng)用細(xì)胞轉(zhuǎn)染、顯微注射或電穿孔等技術(shù),將編輯工具有效傳遞至目標(biāo)細(xì)胞或胚胎內(nèi)。
05
 
培養(yǎng)階段
對(duì)經(jīng)過轉(zhuǎn)染或注射的細(xì)胞或胚胎進(jìn)行適當(dāng)條件下的培養(yǎng),以促進(jìn)基因編輯的順利進(jìn)行。
06
 
效果驗(yàn)證階段
利用PCR、測(cè)序、Western blot等分析技術(shù),確認(rèn)目標(biāo)基因是否已成功被編輯。
07
 
表型觀察階段
對(duì)經(jīng)確認(rèn)成功編輯的細(xì)胞或個(gè)體進(jìn)行深入分析,例如觀察表型的變化、進(jìn)行功能特性鑒定等,以評(píng)估基因編輯的實(shí)際效果與應(yīng)用價(jià)值。

 

圖2. 基于CRISPR/Cas9系統(tǒng)的基因編輯豬技術(shù)流程[4]

 

基因組編輯技術(shù)的迅猛進(jìn)展在基因功能探究與作物特性優(yōu)化等領(lǐng)域已實(shí)現(xiàn)重大突破。隨著CRISPR/Cas系統(tǒng)的持續(xù)進(jìn)化與精進(jìn),基于基因組編輯的前沿育種技術(shù)將進(jìn)一步與高通量表型分析、基因組選擇、快速育種等技術(shù)深度整合,為農(nóng)業(yè)及畜牧業(yè)的創(chuàng)新發(fā)展注入強(qiáng)大動(dòng)力。

 

 

產(chǎn)品推薦

 

產(chǎn)品應(yīng)用

產(chǎn)品定位

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品貨號(hào)

通用型

NLS的SpCas9

Cas9 Nuclease

14701ES

熒光觀察/流式分選

EGFP熒光標(biāo)簽的SpCas9

NLS-Cas9-EGFP Nuclease

11364ES

基因調(diào)控

無剪切酶活性的Cas9

dCas9 Nuclease

11351ES

小分子量遞送

Cas12a

ArCas12a Nuclease

14702ES

Cas12b

AapCas12b Nuclease

14808ES

sgRNA制備

sgRNA合成

Hifair® Precision sgRNA Synthesis Kit

11355ES

sgRNA純化

Hieff NGS® RNA Cleaner

12602ES

 

 

參考文獻(xiàn):

[1] Gao C. Genome engineering for crop improvement and future agriculture. Cell. 2021 Mar 18;184(6):1621-1635.

[2] 楊夢(mèng)冰, 江易林, 祝蕾, 安學(xué)麗, 萬向元. CRISPR/Cas植物基因組編輯技術(shù)及其在玉米中的應(yīng)用. 中國(guó)生物工程雜志, 2021, 41(12): 4-12.

[3] 張格陽(yáng), 張子敬, 翟亞瑩, 呂世杰, 朱肖亭, 朱進(jìn)華, 李崢, 于翔, 王紅利, 施巧婷, 閆祥洲, 王二耀. 基因編輯技術(shù)在我國(guó)畜牧業(yè)的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)畜禽種業(yè), 2022, 18(10): 45-48.

[4] Randall, S, Prathe, et al. Generation of a Commercial-Scale Founder Population of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Resistant Pigs Using CRISPR-Cas [J]. Scientific Reports, 2017. DOI:10.1038/s41598-017-13794-2.



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