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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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RNase（Ribonuclease，核糖核酸酶）是一類能夠催化RNA降解為小分子RNA的核酸內(nèi)切酶，主要切斷核苷酸之間的磷酸二酯鍵，是生物的一種防御機(jī)制，相比于外源性的DNA，外源性的RNA侵入細(xì)胞后會(huì)參與轉(zhuǎn)錄和翻譯，往往更加危險(xiǎn)。所以幾乎所有的生物都進(jìn)化出了RNase，用來(lái)防御外源性RNA的入侵。因此，RNase廣泛存在于真核、原核生物的所有細(xì)胞和組織中，除此之外，環(huán)境和許多生物材料都帶有RNase，像實(shí)驗(yàn)用水與緩沖液、槍頭與離心管、酶及其他相關(guān)試劑和耗材等；實(shí)驗(yàn)大環(huán)境的污染，如空氣、灰塵和大多數(shù)物體的表面；實(shí)驗(yàn)人員的毛發(fā)、皮膚碎屑、汗液和唾液等。
RNase分子非常穩(wěn)定，結(jié)構(gòu)中存在二硫鍵，其活性不需要二價(jià)陽(yáng)離子存在，因此RNase不容易變性，即使高溫或使用變性劑后也容易發(fā)生復(fù)性。
RNase的無(wú)處不在，并且穩(wěn)定性強(qiáng)，耐熱、耐酸、耐堿，使得RNA相關(guān)研究過(guò)程中，RNA樣本中微量的RNase污染也足以讓其降解，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或影響RNA分析的結(jié)果。
RNase分為內(nèi)源性和外源性，其中內(nèi)源性RNase在細(xì)胞破裂時(shí)可同時(shí)釋放出來(lái)，因此消除內(nèi)源性RNase的作用是RNA提取過(guò)程中非常關(guān)鍵的一個(gè)步驟。外源性RNase分布則非常廣泛，空氣、人的皮膚、頭發(fā)和唾液、實(shí)驗(yàn)用水、耗材、原料酶等試劑中都存在RNase，是造成RNA容易降解的重要原因。因此，從源頭上避免RNase污染十分必要，一方面要嚴(yán)格控制外源性RNase的污染，另一方面要最大限度地抑制內(nèi)源性的RNase。
圖1. RNase及抑制劑分類
常見的RNase抑制劑有焦碳酸二乙酯（DEPC）、異硫氰酸胍、氧釩核糖核苷復(fù)合物（RVC）和RNase的蛋白質(zhì)抑制劑（RNasin）。其中，DEPC和異硫氰酸胍具有一定的毒性，RVC對(duì)PCR聚合酶有抑制作用，不利于展開后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。RNase的蛋白質(zhì)抑制劑能夠特異地與RNase以非共價(jià)鍵結(jié)合形成復(fù)合體，造成RNase失活，因不具有毒性，不影響后續(xù)PCR實(shí)驗(yàn)等優(yōu)勢(shì)，常被用來(lái)減少RNase的污染。目前，RNasin主要用于cDNA合成，體外轉(zhuǎn)錄，體外翻譯，以及mRNA-protein復(fù)合物分離純化等過(guò)程中保護(hù)RNA不被降解，還可用于特定RNase活性的鑒定等。
翌圣生物以可溶形式在大腸桿菌中表達(dá)純化的重組鼠源/豬源RNase抑制劑，能夠廣泛抑制各種類型RNase(RNase A, B, C)，并且該抑制劑不會(huì)抑制聚合酶的活性，如：TaqDNA聚合酶、AMV或M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶或噬菌體RNA聚合酶（SP6、T7或T3），已驗(yàn)證可廣泛應(yīng)用于RT-PCR/qPCR、RNA-seq、cDNA克隆和文庫(kù)構(gòu)建等多個(gè)應(yīng)用場(chǎng)景。
此外，除了常規(guī)RNase抑制劑，翌圣生物還開發(fā)了經(jīng)過(guò)UCF.ME®超低殘留工藝處理，宿主殘留更低，適合對(duì)背景菌要求更為嚴(yán)格的應(yīng)用場(chǎng)景的RNase抑制劑，助力解決病原檢測(cè)中的背景菌干擾，提高檢測(cè)準(zhǔn)確度。
無(wú)核酸外切酶、切口酶及RNase殘留
圖2. Murine RNase Inhibitor核酸外切酶、切口酶殘留及RNase殘留檢測(cè)
注：N代表陰性對(duì)照；1、2、3為3組平行實(shí)驗(yàn)。
E.coli基因組DNA殘留< 0.1 copies/100 U，顯著低于常規(guī)版本
對(duì)不同批次的UCF.ME® Murine RNase Inhibitor進(jìn)行宿主（E.coli）基因組DNA殘留檢測(cè)，并與常規(guī)Murine RNase inhibitor的宿主殘留水平對(duì)比，結(jié)果顯示UCF.ME® Murine RNase Inhibitor宿主基因組DNA殘留低于0.1 copies/100 U，顯著低于常規(guī)版本。
圖3.UCF.ME® MRI與常規(guī)版MRI中E.coli基因組殘留檢測(cè)結(jié)果對(duì)比
8U/T投入量能有效抑制70ng RNase A
以Total RNA為模板，配制RT-qPCR反應(yīng)體系，驗(yàn)證UCF.ME® Murine RNase Inhibitor (Cat#14672ES)消化RNaseA能力，結(jié)果表明UCF.ME® Murine RNase Inhibitor (Cat#14672ES)能有效抑制RNase A，且相較市面上同類產(chǎn)品抑制能力更有優(yōu)勢(shì)。
圖4.UCF.ME® Murine RNase Inhibitor (Cat#14672ES)對(duì)RNase抑制能力驗(yàn)證
兼容NGS應(yīng)用體系：建庫(kù)產(chǎn)量及宿主DNA殘留優(yōu)于進(jìn)口品牌
UCF.ME® Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)搭配翌圣全能型逆轉(zhuǎn)錄酶Hifair® Ultra Reverse Transcriptase (200 U/μL) (Cat#14604ES)應(yīng)用于RNA建庫(kù)，建庫(kù)產(chǎn)量高于進(jìn)口品牌，測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量相當(dāng)且宿主DNA殘留更低。
圖5. 14675ES搭配14604ES應(yīng)用于RNA-seq建庫(kù)產(chǎn)量
圖6. 14675ES搭配14604ES應(yīng)用于RNA-seq測(cè)序質(zhì)量
產(chǎn)品定位 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) |
鼠源RNase抑制劑 | Murine RNase inhibitor (40 U/μL) | 10603ES |
Murine RNase Inhibitor (200 U/µL) | 10610ES | |
Murine RNase Inhibitor (300 U/µL) | 14671ES | |
低殘留鼠源RNase抑制劑 | UCF.ME® Murine RNase Inhibitor (40 U/μL) | 14672ES |
UCF.ME® Murine RNase Inhibitor (200 U/μL) | 14673ES | |
UCF.ME® Murine RNase Inhibitor (300 U/μL) | 14674ES | |
低殘留豬源RNase抑制劑 | UCF.ME® Swine RNase Inhibitor (40 U/μL) | 14675ES |
無(wú)甘油版RNase抑制劑 | Murine RNase Inhibitor(40 U/µL,Glycerol-free) | 10701ES |
Murine RNase Inhibitor (200 U/μL, Glycerol-free) | 10703ES |
