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產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一種常用的細(xì)胞核熒光染料，作為一種溴化乙錠（EB）的類似物，能夠嵌入堿基之間實(shí)現(xiàn)與DNA結(jié)合。這種結(jié)合沒有或者幾乎無序列傾向性，大約每4-5個(gè)DNA堿基對結(jié)合一個(gè)染料。PI也能與RNA結(jié)合，需要用核酸酶處理來區(qū)分DNA和RNA染色。水溶液中PI的zui大激發(fā)/發(fā)射波長是493/636nm。一旦與核酸結(jié)合，熒光信號明顯增強(qiáng)20-30倍，zui大激發(fā)波長向紅色波段遷移~30-40nm，zui大發(fā)射波長向藍(lán)色波段遷移~15nm，從而使其zui大激發(fā)/發(fā)射波長變?yōu)?/span>535/617nm。PI的摩爾吸光系數(shù)相對比較低，但是其具有足夠大的斯托克司頻移來同時(shí)檢測核酸DNA和熒光標(biāo)記抗體，只需要使恰當(dāng)?shù)臑V片。PI適用于熒光顯微鏡，共聚焦顯微鏡，流式細(xì)胞儀以及熒光計(jì)分析。

PI不能穿透細(xì)胞膜而被排斥在活細(xì)胞外，但是可以穿過破損的細(xì)胞膜而對核染色。利用這一特性，通常與Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等活細(xì)胞熒光探針一起使用，同時(shí)對活細(xì)胞和死細(xì)胞染色和鑒定，用于細(xì)胞凋亡相關(guān)的研究。也可以用作多重?zé)晒馊旧膹?fù)染劑，兼容于各種細(xì)胞標(biāo)記技術(shù)，包括直接或者間接的熒光抗體檢測，mRNA原位雜交，細(xì)胞結(jié)構(gòu)特異性的熒光探針檢測法以及組織染色。PI的單獨(dú)染色也可以進(jìn)行細(xì)胞周期的檢測。

產(chǎn)品性質(zhì)

運(yùn)輸與保存方法

冰袋（wet ice）運(yùn)輸。4 ºC避光保存，至少一年穩(wěn)定。

使用方法

1. 儲(chǔ)存液的配制

稱取1mg PI粉末（M. Wt= 668.4），用1ml去離子水充分溶解后配置成1mg/ml（1.5 mM）的儲(chǔ)存液。4 ºC避光保存，至少6個(gè)月穩(wěn)定。

1. 貼壁細(xì)胞復(fù)染步驟（熒光顯微鏡檢測）

1. 樣本準(zhǔn)備：根據(jù)自身樣本選擇合適的步驟固定細(xì)胞。PI染色一般在其它染色完成后再進(jìn)行。PI復(fù)染要求細(xì)胞經(jīng)透化處理。
2. RNase酶處理：若樣本使用多聚甲醛，甲醛或者戊二醛固定，則需要進(jìn)行RNase處理。若樣本用甲醇/醋酸或者丙酮固定，通常不需要此步操作。a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本；b，將本品置于含有100 µg/mL DNase-free RNase的2×SSC溶液中37°C孵育20min；c，用2×SSC溶液清洗樣本3次，每次1min。
3. 復(fù)染：a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本；b，直接用2X SSC稀釋1mg/ml（1.5 mM）PI儲(chǔ)存液 1:3000，得到500 nM的PI工作液。通常添加300µL染液足夠用于一個(gè)蓋玻片細(xì)胞制片。染色1-5min。c，2×SSC清洗幾次，流盡多余的緩沖液后，加入抗淬滅劑封片（比如Yeasen，貨號：36308ES08）。d，選擇熒光顯微鏡的合適濾片進(jìn)行觀察。

1. 懸浮細(xì)胞復(fù)染步驟（流式細(xì)胞儀檢測）

1. 樣本準(zhǔn)備：根據(jù)自身樣本選擇合適的步驟固定細(xì)胞?；蛘呤褂萌缦碌牟襟E：

• 收集一定量的細(xì)胞，密度約 2 × 10⁵ ~1 × 10⁶。離心收集細(xì)胞，吸掉上清液，用手輕彈管壁就剩下

的液體重懸細(xì)胞。之后加入1ml常溫存放的PBS；

• 將所有的重懸細(xì)胞轉(zhuǎn)移到4ml于-20ºC預(yù)冷的無水乙醇，在高速渦旋混勻的同時(shí)一邊用槍緩慢的添

加細(xì)胞懸液到乙醇內(nèi)。于-20ºC乙醇中固定5-15min。

• 離心收集細(xì)胞，除去乙醇。用手輕彈管壁以彈松細(xì)胞后，加入5ml室溫的PBS。允許細(xì)胞水化15min；

1. 復(fù)染

• 用染色液（100 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl₂ , 0.5 mM MgCl₂ , 0.1% Nonidet^® P-40）稀

釋1mg/ml（1.5 mM）PI儲(chǔ)存液 1:500，得到3 µM的PI工作液。1ml的PI染色液足夠用于每個(gè)細(xì)胞樣本的檢測。注：工作液的使用濃度可以根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)體系調(diào)整，也可以直接使用PBS，HBSS等緩沖液直接稀釋PI儲(chǔ)存液到需要的濃度。

• 樣本制備的zui后一步后離心收集細(xì)胞，去除上清，用手輕彈管壁以彈松細(xì)胞后，加入1ml的PI染

色工作液。室溫孵育15min后，流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞分析。若用流式顯微鏡觀察，則需要離心樣本，去除上清并重懸細(xì)胞在新鮮的緩沖液中。吸取1滴懸液到載玻片上，蓋上蓋玻片后觀察。

1. 染色質(zhì)FISH復(fù)染步驟

1. 樣本準(zhǔn)備：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)步驟制備樣本。復(fù)染之前的zui后一步用去離子水清洗樣本以去除玻片上殘留的緩沖鹽。室溫晾干。此步驟有助于減少非特異性的背景染色。
2. 復(fù)染

• 工作液的配制：用PBS緩沖液直接稀釋1 mg/ml（1.5 mM）的PI儲(chǔ)存液1:1000，得到1.5 µM的

PI染色工作液。滴加300µL的工作液直接到樣本。有必要的話，工作液內(nèi)加入新鮮制備的RNase A（終濃度：10 µg/mL）?？墒褂盟芰仙w玻片均勻分布染液在載玻片上。室溫避光條件下孵育樣本30 min；如

果加入RNase則37ºC孵育。

1. 去除蓋玻片，用PBS或去離子水清洗以除去沒有結(jié)合的染料；
2. 用吸水紙巾圍繞著樣本周圍吸取殘留液體，蓋上玻璃蓋玻片后用石蠟或者指甲油封住蓋玻片邊緣。也可用抗熒光淬滅劑進(jìn)行封片。
3. 選擇熒光顯微鏡的合適濾片進(jìn)行觀察。

注意事項(xiàng)

1. 碘化丙啶（PI）是已知的誘變劑，因此PI溶液在丟棄之前需要先經(jīng)過活性炭處理。
2. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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