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10107ES62HieffLongTaqDNAPolymerase長(zhǎng)片段DNA聚合酶
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 10107ES62 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：1334更新時(shí)間：2022-02-09 13:54:39
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 125U |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 10107ES62 |
產(chǎn)品介紹
Hieff® Long Taq DNA Polymerase 長(zhǎng)片段DNA聚合酶
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
Hieff® Long Taq DNA Polymerase 長(zhǎng)片段DNA聚合酶 | 10107ES62 | 125 U | 155.00 |
Hieff® Long Taq DNA Polymerase 長(zhǎng)片段DNA聚合酶 | 10107ES78 | 5×125 U | 735.00 |
產(chǎn)品描述
Hieff® Long Taq DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase與一種含有3’ →5’外切酶活性的蛋白組成的混合酶，其保真性是Taq DNA Polymerase的6倍，專(zhuān)門(mén)用于長(zhǎng)片段的擴(kuò)增。*的緩沖體系使Hieff® Long Taq DNA Polymerase可擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)8 kb的人基因組片段和10 kb左右的質(zhì)粒模板。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的3’端帶A，可直接用于TA克隆。試劑盒中的PCR Enhancer有助于高GC含量片段的擴(kuò)增。
產(chǎn)品組分
編號(hào) | 組分 | 產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格 | |
10107ES62（125 U） | 10107ES78（5×125 U） | ||
10107-A | Hieff® Long Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 25 μL | 25 μL×5 |
10107-B | 10× Hieff® Long Taq Buffer（Mg2+ free） | 500 μL | 500 μL×5 |
10107-C | 25 mM MgCl2 | 1 mL | 1 mL×5 |
10107-D | dNTP Mix (10 mM each) | 100 μL | 100 μL×5 |
10107-E | 5 × PCR Enhancer | 125 μL | 125 μL×5 |
10107-F | 10 × Loading buffer | 1.25 mL | 1.25 mL×5 |
活性定義
用活性化的大馬哈魚(yú)精子DNA作為模板/引物，74℃, 30 min內(nèi)，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個(gè)活性單位（U）。
質(zhì)量控制
核酸外切酶殘留檢測(cè)：20 μL反應(yīng)體系，10 U本品和1 μg λDNA -HindIII，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無(wú)變化。
核酸內(nèi)切酶殘留檢測(cè)：20 μL反應(yīng)體系，10 U本品和1 μg λDNA，37℃溫育4 h，DNA的電泳譜帶無(wú)變化。
大腸桿菌殘留DNA檢測(cè): 50 μL體系中，加入2 U本品，以無(wú)菌ddH2O為模板，擴(kuò)增E.coil 16s rDNA 基因。30個(gè)循環(huán)后擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1% 瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，無(wú)擴(kuò)增條帶。
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20º℃保存，有效期1年。
注意事項(xiàng)
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
PCR反應(yīng)體系（推薦冰上配制）
組分 | 體積 |
ddH2O | to 50 μL |
10× Hieff® Long Taq Buffer（Mg2+ free） | 5 μL |
25 mM MgCl2 | 3-4 μL |
dNTP Mix (10 mM each) | 1 μL |
5 × PCR Enhancer | 適量 |
DNA模板 | 適量 |
Primer正向 (10 μM) | 2 μL |
Primer反向 (10 μM) | 2 μL |
Hieff® Long Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0.5 μL |
【注】：
1）PCR Enhancer：推薦僅當(dāng)擴(kuò)增片段GC%> 60%且優(yōu)化條件也無(wú)法正常擴(kuò)增時(shí)用；可能會(huì)使保真度有輕微降低。
2）聚合酶濃度：酶量可在0.25-1 μL之間調(diào)整。通常情況下加大酶量可以提高擴(kuò)增產(chǎn)量，但有可能會(huì)使特異性下降。
3）Mg2+終濃度：對(duì)于大多數(shù)由本酶催化的PCR反應(yīng)來(lái)說(shuō)，Mg2+的較優(yōu)濃度為2 mM；如有特殊需要，可在終濃度1.5-2.5 mM區(qū)間內(nèi)調(diào)整Mg2+濃度。
4）不同模板的推薦使用量（50 μL反應(yīng)體系）
模板種類(lèi) | 用量 |
動(dòng)植物基因組DNA | 10-200 ng |
大腸桿菌基因組DNA | 1-100 ng |
λDNA、質(zhì)粒DNA | 0.1-10 ng |
PCR擴(kuò)增程序
1）目的片段＜5 kb
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 30 sec | 30-35 |
退火 | 55℃ | 30 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 7 min | 1 |
【注】:退火溫度需要根據(jù)引物退火溫度調(diào)整，一般設(shè)置成低于引物退火溫度1-2℃即可。
2）目的片段＞5 kb
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 1-3 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-35 |
退火/延伸 | 68℃ | 30-60 sec/kb | |
終延伸 | 68℃ | 7 min | 1 |
【注】:對(duì)于> 5 kb的片段，推薦使用長(zhǎng)引物， Tm值在68-70℃，把退火/延伸溫度合并為68℃。這樣可以顯著提高擴(kuò)增特異性。延長(zhǎng)延伸時(shí)間有助于提高擴(kuò)增產(chǎn)量。
HB190523
