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Streptavidin (SAV) MagBeads 鏈霉親和素（SAV）免疫磁珠

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

鏈親和素(streptavidin)是一種來源于阿維丁鏈霉菌由四個相同亞基組成的結合蛋白質(zhì)，每個亞基均有一個與有高親和力的結合位點。生物學上常將鏈霉親和素包被在磁珠上，借鏈霉親和素-高親和力結合特性，結合素化蛋白，多肽，及非蛋白質(zhì)（如各種 DNA、RNA 分子）等分子，進而從混合體系中快速分離化成分，進行如親和純化，細胞分離，DNA 探針分析和 mRNA 分離等多方面應用。

本品streptavidin 磁珠可配合實驗需要選擇標記的各種單抗去分離細胞，應用范圍廣泛，使用靈活。其原理是在實驗系統(tǒng)中加入標記的單抗，磁珠通過 streptavidin 與標記的單抗結合后，單抗與細胞表面相應抗原特異性結合而使細胞被磁珠間接捕獲，從而達到純化分離細胞的目的。

產(chǎn)品性質(zhì)

運輸和保存方法

冰袋運輸。4℃保存。

注意事項

1）免疫磁珠易沉降聚集，因此產(chǎn)品使用前要劇烈振蕩或超聲處理。

2）Fc 受體（FcR）封閉：在某些實驗中，部分抗體會通過其Fc段與不同細胞表面的FcR 結合，出現(xiàn)非特異性反應。此時可預先將細胞與IgG 或針對FcR的特異性抗體室溫孵育5-10min，一般10⁷細胞中可加入1-10μg IgG或FcR 的特異性抗體進行封閉。

3）如果分選的細胞進一步用作細胞培養(yǎng)實驗，所有步驟都需在無菌環(huán)境及條件下進行。

4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法（細胞分選操作流程）

由于不同抗體的親和力，欲分離細胞在混合體系中所占比例以及細胞表面靶抗原密度的差異，操作流程中所提供的相關參數(shù)不一定適用于所有的細胞分選實驗。因此實驗前應對 化抗體使用濃度，磁珠與細胞反應比例，及反應時間進行滴定，優(yōu)化以達到*的細胞分選效果。

1. 分離單細胞：使用淋巴細胞分離液從抗凝血中提取外周血單個核細胞（PBMC），或者從淋巴組織中制備單細胞懸液。PBMC用含5%BSA，0.09%NaN₃的PBS，pH7.4 洗3次，40-70μm尼龍網(wǎng)過濾去除細胞團塊和碎片后調(diào)整細胞數(shù)為2-3×10⁷/ml。

【注】：反應體系中加入5-10%蛋白可降低非特異性反應，但蛋白濃度太高會降低分選效率。

2. 向PBMC 中加入適量化抗體，一般1×10⁷ PBMC 中加入0.5-10μg 抗體，室溫反應30min。

3. 1000rpm離心5min，棄上清中未結合的化抗體。加入1ml磁珠分選緩沖液重懸細胞，1000rpm 離心5min，棄上清，洗2次。

4. 1ml磁珠分選緩沖液重懸細胞，將細胞與50μl 免疫磁珠混合，室溫反應30min，間隔10min輕輕晃動反應管，避免磁珠沉淀，使磁珠與細胞充分反應，盡量防止出現(xiàn)氣泡。之后進入后續(xù)細胞分選。

5. 細胞分選 (Negative Selection)

5.1 陰性分選

① 磁分器分離5-8min，收集未被免疫磁珠結合的細胞懸液至另一干凈管中。

② 加入1ml磁珠分選緩沖液重懸磁珠，用玻璃滴管或移液槍槍頭反復吹打磁珠。

③ 重復步驟①，合并兩次收集的細胞懸液，可將細胞懸液再置磁分離器分離 5-8min，可明顯增加靶細胞純度。

5.2 陽性分選 (Positive Selection)

① 磁分離器分離5-8min，去除未與磁珠結合的細胞。

② 結合了靶細胞的免疫磁珠用1ml 磁珠分選緩沖液洗5次（5×1ml）后，可直接進行流式檢測，或者37℃培養(yǎng)48h可使細胞與磁珠分離。

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