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- 20540ES25 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù):829更新時間:2022-02-10 11:59:15
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本品DEAE弱陰離子交換樹脂以高度交聯(lián)的6%瓊脂糖為介質(zhì),可耐受較高的流速及更高的化學(xué)穩(wěn)定性,適合實(shí)驗(yàn)室及工業(yè)大規(guī)模純化。本品離子交換基團(tuán)-O-CH2CH2-N (C2H5)2。
HiSep DEAE Agarose Resin 6FF
DEAE弱陰離子高速交換樹脂
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價格(元) |
HiSep DEAE Agarose Resin 6FF (HiSep DEAE弱陰離子高速交換樹脂) | 20540ES25 | 25ml | 4℃ | 258.00 |
HiSep DEAE Agarose Resin 6FF (HiSep DEAE弱陰離子高速交換樹脂) | 20540ES60 | 100ml | 4℃ | 648.00 |
HiSep DEAE Agarose Resin 6FF (HiSep DEAE弱陰離子高速交換樹脂) | 20540ES75 | 300ml | 4℃ | 1538.00 |
產(chǎn)品描述
離子交換樹脂主要包括強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂、弱酸性陽離子交換樹脂、強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂和弱堿性陰離子交換樹脂4種,廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的分離純化。
本品DEAE弱陰離子交換樹脂以高度交聯(lián)的6%瓊脂糖為介質(zhì),可耐受較高的流速及更高的化學(xué)穩(wěn)定性,適合實(shí)驗(yàn)室及工業(yè)大規(guī)模純化。本品離子交換基團(tuán)-O-CH2CH2-N (C2H5)2。
產(chǎn)品性質(zhì)
基質(zhì)(Matrix) | 高度交聯(lián)的6%瓊脂糖微球 |
粒徑(Bead size) | 45-165µm |
離子交換類型(Type) | 弱陰離子 |
載量(Capacity) | ~0.11-0.16mmol Cl-/ml 基質(zhì) |
流速(Flow Rate) | 300-600cm/h |
pH范圍(pH Range) | 2-12 |
儲存緩沖液(Buffer) | 20%乙醇 |
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。4℃保存,有效期2年。
使用方法
1 緩沖液的準(zhǔn)備
所用水和Buffer在使用前用0.22µm或0.45µm濾膜過濾。
2 樣品準(zhǔn)備
樣品在使用前用0.22µm或0.45µm濾膜過濾,減少雜質(zhì),提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。
3 裝柱(使用儲液器裝填)
1)用去離子水沖洗層析柱底篩板與接頭,確保柱底篩板上無氣泡,關(guān)閉柱底出口,并在柱底部留出1-2cm的去離子水。
2)將樹脂懸浮起來,小心的將漿液連續(xù)地倒入層析柱中。用玻璃棒沿著柱壁倒入漿液可減少氣泡的產(chǎn)生。
3)如果使用儲液器,應(yīng)立即在層析柱和儲液器中加滿水,將進(jìn)樣分配器放置于漿液表面,連接至泵上,避免在分配器或進(jìn)樣管中產(chǎn)生氣泡。
4)打開層析柱底部出口,開起泵,使其在設(shè)定的流速下進(jìn)行。zui初應(yīng)讓緩沖液緩慢流過層析柱,然后緩慢增加至zui終流速, 這樣可避免液壓對所形成柱床的沖擊,也可以避免柱床形成的不均勻。如果達(dá)不到推薦的壓力或流速,可以用你所使用泵的zui大流速, 這樣也可以得到一個很好的裝填效果(【注】:在隨后的色譜程序中,不要超過zui大裝柱流速的75%)。當(dāng)柱床高度穩(wěn)定后,在zui后的裝柱流速下至少再上3倍柱床體積的去離子水。標(biāo)上柱床高度。
5)關(guān)閉泵,關(guān)閉層析柱出口。
6)如果使用儲液器,去除儲液器,將分配器至于層析柱中。
7)將分配器推向柱子至標(biāo)記的柱床高度處。允許裝柱液進(jìn)入分配器,鎖緊分配器接頭。
8)將裝填好的層析柱連接至泵或色譜系統(tǒng)中,開始平衡。如果需要可以重新調(diào)整分配器。
4 樣品純化
1)將介質(zhì)裝入合適的層析柱,層析用5倍柱體積的結(jié)合Buffer進(jìn)行平衡,使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下,起到保護(hù)蛋白的作用。
2)將樣品加到平衡好的HiSep DEAE Agarose Resin 6FF中(保證目的蛋白與Resin充分接觸,提高目的蛋白的回收率),收集流出液。
3)用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進(jìn)行清洗,去除非特異性吸附的雜蛋白,收集洗雜液。
4)使用5-10倍柱體積的洗脫Buffer,收集洗脫液,即目的蛋白組分。
5)依次使用3倍柱體積的結(jié)合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料,zui后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡,然后保存在等體積的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被細(xì)菌污染。
5 SDS-PAGE 檢測
將得到的樣品(包括流出組分、洗雜組分和洗脫組分)以及原始樣品使用SDS-PAGE 檢測純化效果。
6 填料清洗
離子交換樹脂每次使用后可以用1M NaCl 甚至更高離子強(qiáng)度溶液或高pH溶液清洗,然后用至少5倍柱體積的Buffer 進(jìn)行平衡至離子強(qiáng)度或pH值穩(wěn)定。
CIP(Cleaning In Place)清洗
離子交換樹脂可以重復(fù)使用而無需再生,但隨著非特異性結(jié)合的蛋白的增多和蛋白的聚集,往往造成流速和結(jié)合載量都下降,這時可按照下面方法對樹脂進(jìn)行清洗。
1)去除一些沉淀或變性物質(zhì)
用2倍柱體積的1M NaOH 溶液進(jìn)行清洗,然后立即用5倍柱體積的PBS, pH7.4清洗。
2)去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì)
用3-4倍柱體積的70%乙醇或3-4倍柱體積的1% Triton™ X-100 清洗,然后立即用5倍柱體積的PBS, pH7.4清洗。
3)去除一些離子鍵結(jié)合物質(zhì)
用3-4倍柱體積的2M NaCl清洗,然后立即用5倍柱體積的PBS, pH 7.4清洗。
注意事項(xiàng)
1)請勿冷凍保存本產(chǎn)品。
2)Resin使用前一定要充分顛倒若干次,使瓊脂糖珠混合均勻。
3)所有操作過程中,樣本需要在4℃或冰上操作。
4)為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
附表 問題及解決方案
問題 | 可能原因 | 推薦解決方案 |
柱子反壓過高 | 填料被堵塞 | 按照【填料清洗】部分對樹脂進(jìn)行清洗。 |
樣品中含有微小的固體顆粒,建議使用前用0.22µm或0.45µm濾膜過濾。 | ||
洗脫樣品較雜 | 樹脂重復(fù)多次使用 | 按照【填料清洗】部分對樹脂進(jìn)行清洗或更換新樹脂。 |
平衡不充分 | 增加平衡液體積,確保樹脂充分平衡/洗雜。 |
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格元 |
20540ES25 | HiSep DEAE Agarose Resin 6FF (HiSep DEAE弱陰離子高速交換樹脂) | 25ml | 258.00 |
20540ES60 | HiSep DEAE Agarose Resin 6FF (HiSep DEAE弱陰離子高速交換樹脂) | 100ml | 648.00 |
20540ES75 | HiSep DEAE Agarose Resin 6FF (HiSep DEAE弱陰離子高速交換樹脂) | 300ml | 1538.00 |
20541ES03 | HiSep DEAE 6FF Chromatography Column, 1ML(HiSep DEAE弱陰離子純化預(yù)裝柱,1ML) | 1ml | 138.00 |
20542ES08 | HiSep DEAE 6FF Chromatography Column, 5ML(HiSep DEAE弱陰離子純化預(yù)裝柱,5ML) | 5ml | 528.00 |