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 HB161125

Lymphocytes Subgroup Typing Kit (Human)

人淋巴細胞亞群分析試劑盒

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

根據(jù)生物學功能及細胞表面的抗原表達，可以將人外周血淋巴細胞分為三群：T淋巴細胞、B淋巴細胞和NK細胞。T淋巴細胞的作用主要是參與特異抗原介導的細胞免疫反應，并調(diào)節(jié)B淋巴細胞分泌免疫球蛋白。T淋巴細胞按其功能又可進一步分為輔助/誘導性T細胞和抑制/細胞毒性T細胞。NK細胞，即自然殺傷細胞，介導對某些腫瘤細胞和病毒感染細胞的細胞毒作用，而不依賴于MHC Ⅰ類和Ⅱ類分子的存在。

是由一系列雙色熒光標記抗體組成的試劑盒，主要用于檢測外周血淋巴細胞各亞群占總淋巴細胞的百分率，即成熟T淋巴細胞（CD3＋）、輔助/誘導性T細胞（Th/i :CD3＋CD4＋）、抑制/細胞毒性T細胞（Ts/c: CD3＋CD8＋）、B淋巴細胞（CD19＋）和NK細胞（CD3－CD16＋和/或CD56＋）；還可以計算出Th/Ts（CD3＋CD4＋/CD3＋CD8＋）細胞的比例。

相對于傳統(tǒng)的分析淋巴細胞亞群的方法，流式細胞術將抗體的特異性和流式細胞儀分析單個細胞的敏感性結(jié)合起來，使得這一分析方法更精確、更簡便。

該試劑盒用于檢測人外周血樣品，推薦用于流式（FCM）和免疫熒光（IF）。

產(chǎn)品組分

注：抗體儲存液為PBS，pH7.4，含0.09%疊氮鈉和0.2%（w/v）BSA。20μl/次。

運輸和保存方法

運輸方式：冰袋運輸

保存方式：4℃避光保存，嚴禁凍存，避免直接暴露于光線下。

注意事項

1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2. 孵育時間、溫度及離心時間應參考操作說明，否則可能影響實驗結(jié)果。
3. 服用免疫抑制劑的患者其結(jié)果可能會異常。
4. 溶血標本不能用本試劑盒檢測。
5. 抗體試劑中均含有防腐劑疊氮鈉，是一種有毒物質(zhì)，操作時避免與皮膚、粘膜接觸。
6. 本試劑盒只對人的標本做過檢測，未對其它的物種進行檢測。
7. 不能將不同的組分混在同一管樣品中進行測定。

產(chǎn)品應用

試劑40404-A：Mouse IgG2a-FITC & Mouse IgG1-PE，同型對照；用于設定陰性范圍，消除非特異性熒光的干擾。

試劑40404-B：hCD45-FITC & hCD14-PE，用于淋巴細胞圈門。hCD45-FITC，識別所有白細胞；hCD14-PE，識別人單核細胞及少量粒細胞。

試劑40404-C：hCD3-FITC & hCD19-PE，用于確定T淋巴細胞和B淋巴細胞的百分率。hCD3-FITC，識別所有成熟T淋巴細胞；hCD19-PE，識別所有B淋巴細胞。

試劑40404-D：hCD3-FITC & hCD4-PE，用于確定輔助性T淋巴細胞（CD3+CD4+）占總淋巴細胞的百分率；hCD14-PE，識別輔助性T細胞（Th/i）及單核細胞。

試劑40404-E：hCD3-FITC & hCD8-PE，用于確定抑制性T淋巴細胞（CD3+CD8+）占總淋巴細胞的百分率；hCD8-PE，識別抑制性T細胞（Ts/c）及NK細胞。

試劑40404-F：hCD3-FITC & hCD16-PE & hCD56-PE，用于確定T淋巴細胞和NK細胞的百分率；hCD16與hCD56抗體識別NK細胞。

試劑40404-G：10×RBC Lysing Buffer，裂解紅細胞，利于分析外周血白細胞。

使用方法

1 標本的采集與制備

EDTA抗凝的靜脈血（至少1ml），建議標本在采集后6h內(nèi)進行染色分析。檢測的外周血白細胞濃度在3.0×103~10.0×103個/μl。（若高于10.0×103個/μl，則需要稀釋血標本；若低于10.0×103個/μl，則需要增加標本量或分離白細胞）

2 紅細胞裂解液的稀釋

計算所需要的紅細胞裂解液工作液體積（每管加2ml 1×工作液），取適量40404-G，用去離子水稀釋到1×工作液。紅細胞裂解液的溶血效力受溫度影響，使用前要預先平衡至室溫（20℃~25℃）。

【注】稀釋后避光室溫保存，根據(jù)每次所需量進行稀釋。

3 染色及固定細胞

1）每份病人標本用六根12×75mm流式管，分別標上樣品編號（1、2、3……）和管號（A、B、C、D、E、F）

2）取20μl試劑A加入到每份樣品的A管中，取20μl試劑B加入到每份樣品的B管中，取20μl試劑C加入到C管中，取20μl試劑D加入到D管中，取20μl試劑E加入到E管中，取20μl試劑F加入到F管中。

3）向每份標本的試管中加入100μl抗凝全血，充分混勻，室溫（20℃~25℃）避光反應20~30min。

4）每管加入2ml（1×）紅細胞裂解液（20℃~25℃），充分混勻，室溫避光反應10~12min，至液體透明。

5）1000rpm離心5min，棄上清。

6）加入2ml PBS洗滌液，1000rpm離心5min，棄上清。【PBS洗滌液配方：PBS+1% FBS】

7）細胞染色后立即上流式細胞儀分析；或用0.5ml 2%甲醛溶液固定細胞，4℃過一夜。

4 流式檢測

用流式細胞儀檢測，激發(fā)波長Ex=488nm；發(fā)射波長Em=578nm，PE的橙紅色熒光建議使用FL2通道檢測；FITCzui大激發(fā)波長為Ex=488 nm，zui大發(fā)射波長Em=525 nm，F(xiàn)ITC的綠色熒光在FL1通道檢測。使用試劑40404-A作為陰性對照，試劑40404-B用于淋巴細胞圈門。