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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·12年
10300ES80T4 DNA Ligase （5 U/µl）
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 10300ES80 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：1041更新時(shí)間：2022-02-09 15:29:01
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- 網(wǎng)址：
- www.yeasen.com
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1000 U |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 10300ES80 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 標(biāo)記RNA 3’-末端,環(huán)化RNA和DNA寡聚核苷酸以及克隆cDNA等核酸操作 |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱
產(chǎn)品編號(hào)
規(guī)格
價(jià)格（元）
Hieff® Gold T4 DNA Ligase (5 U/µL)
10300ES80
1000 U
425.00
Hieff® Gold T4 DNA Ligase (5 U/µL)
10300ES97
50000 U
18654.00
產(chǎn)品描述Hieff® Gold T4 DNA Ligase在ATP做輔酶的情況下可催化dsDNA 平末端或粘性末端相鄰核酸的5’磷酸末端和3’羥基末端形成磷酸二酯鍵，還可催化RNA和雙鏈中的ssDNA 或RNA 鏈連接，但不能催化全單鏈核苷酸間的連接。
本品主要適用于標(biāo)記RNA 3’-末端，環(huán)化RNA和DNA寡聚核苷酸以及克隆cDNA等核酸操作。
產(chǎn)品組分組分編號(hào)
組分名稱
產(chǎn)品貨號(hào)（規(guī)格）
10300ES80（1000 U）
10300ES97（50000 U）
10300-A
Hieff® Gold T4 DNA Ligase (5 U/µL)
200 µL
10 mL
10300-B
10 × Ligase Buffer
400 µL
20 mL
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，有效期2年。
單位定義
在20 μL的連接反應(yīng)體系中，6 μg的λDNA-Hind Ⅲ 分解物在16℃下反應(yīng)30 min時(shí)，催化50%以上的DNA片段發(fā)生連接所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位(U)。
質(zhì)量控制
核酸外切酶殘留檢測(cè)：10 U本品和0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。切口酶殘留檢測(cè)：10 U本品和0.5 μg IL23R質(zhì)粒，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。
注意事項(xiàng)1）Buffer在融解時(shí)，如果出現(xiàn)少量沉淀屬正?，F(xiàn)象，請(qǐng)顛倒混勻后使用。
2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
3）本產(chǎn)品僅作科研用途！
使用方法
1. 在無菌微量離心管中配制以下反應(yīng)體系：
組分
使用量
載體DNA
50-100 ng
插入片段
片段與載體的分子摩爾比應(yīng)在3:1-5:1
10 × Ligase Buffer
2 µL
Hieff® Gold T4 DNA Ligase (5 U/µL)
1 µL
ddH2O
To 20 µL
【注】：平末端載體與DNA片段進(jìn)行連接時(shí)，應(yīng)先將載體進(jìn)行去磷酸化處理，以防發(fā)生自連接現(xiàn)象。為提高連接效率，每20 µL反應(yīng)體系中可以加2 µL 50% PEG 4000。
2. 16℃反應(yīng)過夜。
3. 轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)
1）將連接產(chǎn)物加入到100 µL 感受態(tài)細(xì)胞中（連接產(chǎn)物不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞的1/10），輕彈混勻，冰上孵育30 min。
2）將離心管于42℃，熱激90 sec（不要晃動(dòng)），之后立刻置于冰水浴靜置2-3 min。
3）向離心管中加入900 µL LB或SOC培養(yǎng)基，37℃，150 rpm，振蕩培養(yǎng)45 min，該過程使菌體復(fù)蘇，抗性基因表達(dá)。
4）2500 g 離心5 min，吸去900 µL上清，用剩余培養(yǎng)基重懸菌體，用無菌涂布棒將剩余菌體在正確抗性的平板上涂布均勻，待菌液被平板吸收后，37℃倒置培養(yǎng)過夜。
【注】：如果使用超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞（轉(zhuǎn)化效率＞108 cfu/µg），可直接吸取100-200 µL 37℃孵育后的菌液涂板，剩余菌液可在4℃保存，1周內(nèi)均可重新涂板。
相關(guān)產(chǎn)品產(chǎn)品名稱
貨號(hào)
規(guī)格
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶HOT
10148ES60/76/80
100/500/1000 U
零背景TOPO-TA克隆試劑盒HOT
10907ES20
20 T
零背景TOPO-Blunt平末端克隆試劑盒HOT
10909ES20
20 T
一步法快速克隆試劑盒HOT
10911ES25/62
25/5×25 T
多片段一步法快速克隆試劑盒HOT
10912ES10/50
10/5×10 T
HB210924
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