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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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41107ES03HEK-293T-ACE2過表達細胞株
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準- 41107ES03 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：1279更新時間：2022-02-11 10:09:33
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | 41107ES03 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
HEK-293T-ACE2 Cell Line
HEK-293T-ACE2過表達細胞株
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 價格（元） |
HEK-293T- ACE2 Cell Line HEK-293T ACE2過表達細胞株 | 41107ES03 | 1 mL（5E6 Cell/mL） | 18500.00 |
產(chǎn)品描述
ACE2即血管緊張素轉(zhuǎn)化酶II（Angiotensin-converting enzyme 2），是I型整合膜蛋白，廣泛分布于肺部、心臟和腎臟等組織，可以調(diào)節(jié)血壓和體液平衡；同時也是冠狀病毒的功能受體，介導病毒入侵和細胞融合。ACE2主要包括N端PD區(qū)（Peptidase domain）和C端CLD區(qū)（Collectrin-like domain），其中位于胞外的PD區(qū)可結(jié)合新///冠病毒S蛋白的RBD（Receptor binding domain），且在特定蛋白酶的幫助下，S蛋白可誘導ACE2胞外區(qū)脫落，繼而由ACE2胞內(nèi)結(jié)構(gòu)來幫助病毒的入侵和感染。
本細胞系是將ACE2過表達慢病毒感染293T細胞并篩選得到的穩(wěn)定株。
產(chǎn)品組分
產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 數(shù)量 | 保存條件 |
41107ES03 | 1 mL（5E6 Cell/mL） | 1管 | -80°C保存 |
運輸與保存方法
干冰運輸。收到之后如不立即復蘇，請立即轉(zhuǎn)入液氮儲存。
【注】：收到產(chǎn)品后，請立即確認產(chǎn)品是否為凍存狀態(tài)。
注意事項
1.接觸產(chǎn)品請帶手套。
2.本產(chǎn)品相關實驗操作，應在二級生物安全實驗室或生物安全柜中進行。
使用方法
1. 細胞復蘇
1）細胞凍存密度為5E6 cells/mL，凍存管分裝1 mL。
2）在37 ℃水浴鍋預熱培養(yǎng)基，將9 mL預熱*培養(yǎng)基加入到15 mL離心管中；
3）從液氮中取出凍存的細胞并迅速放入37 ℃水浴鍋中，將細胞液面浸至水面以下，輕輕搖動至融化；
4）用70%乙醇擦拭凍存管外部以降低污染的幾率；
5）在生物安全柜或超凈臺中將凍存管中的細胞懸液轉(zhuǎn)移到預先加有預熱好的15 mL的離心管中，輕輕混勻，離心5min、轉(zhuǎn)速800 rpm，使細胞沉淀，棄上清。
6）使用15 mL培養(yǎng)基重懸細胞，此時活細胞密度應為2E5-3E5 Cells/mL?？扇〕霾糠质褂门_盼藍染色計數(shù)活細胞。
7）將細胞接種到1個10 cm培養(yǎng)皿（10 mL,培養(yǎng)面積78 cm2）和1個6 cm培養(yǎng)皿（5 mL,培養(yǎng)面積28 cm2）中。此時細胞密度應為：20~30%。
8）放入37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育24 h，鏡下觀察細胞貼壁情況，如已貼壁，根據(jù)細胞密度，小心更換培養(yǎng)基或進行細胞傳代。當細胞密度大于60%時，即可進行傳代，細胞密度不可大于80%。如未*貼壁，繼續(xù)孵育至48 h。
9）*復蘇后，約48 h可進行第—次傳代。
【注】：推薦細胞培養(yǎng)基和凍存液如下：
細胞生長培養(yǎng)基： | 90% DMEM+10% FBS+1%雙抗+0.75 μg/mL嘌呤霉素 |
細胞凍存培養(yǎng)基： | 90%FBS+10%DMSO |
- 細胞傳代
1）細胞消化液：0.25% Trypsin-EDTA，消化時間為：30-60 s
2）貼壁細胞按細胞密度（匯合度）進行傳代，推薦細胞傳代比例為1:4-1:5，隔天傳代。
【注】：細胞密度大于60%即可進行傳代，細胞密度不可高于80%。
3）吸出皿或培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)液，然后用適量的PBS潤洗1~3次。
4）棄PBS，加1 mL細胞消化液，37 °C培養(yǎng)箱中消化30~60 s，顯微鏡下觀察待細胞變圓，細胞間隙明顯，部分細胞剛開始脫離瓶壁。
5）加2 mL左右*培養(yǎng)液混勻終止消化，將細胞小心吹打下來，室溫離心5 min，轉(zhuǎn)速800 rpm/min。
6）棄上清，細胞沉淀用*培養(yǎng)液重懸，根據(jù)傳代前細胞密度分盤（根據(jù)培養(yǎng)皿面積和細胞密度計算，傳代后細胞密度為20-30%）。
【注】：貼壁細胞典型密度與細胞數(shù)量如下：
培養(yǎng)皿 | 培養(yǎng)基（ mL） | 面積（cm2） | 接種細胞量 | 匯合度100% |
35 mm Dish | 2 | 9.6 | 3.2 × 105 | 1.3 × 106 |
60 mm Dish | 5 | 28 | 7.8 × 105 | 3.1 × 106 |
100 mm Dish | 10 | 78 | 2.3 × 106 | 9.0 × 106 |
T-25 Flask | 5 | 25 | 6.9 × 105 | 2.6 × 106 |
T-75 Flask | 10 | 75 | 2.1 × 106 | 8.4 × 106 |
- 細胞凍存
1）2×細胞凍存液：80%FBS+20%DMSO
2）細胞計數(shù)后，1000 rpm，3 min離心收集細胞；
3）使用預冷的FBS調(diào)節(jié)細胞密度至2×；
4）加入與FBS等體積的2×細胞凍存液，輕輕混勻；
5）每管1 mL分裝到細胞凍存管中，凍存體積為1 mL，凍存密度為5E6 cells/mL；
6）擰緊蓋子，適當標記后，將細胞凍存管置于梯度降溫盒中，在-80 ℃下保存至少1天，盡快轉(zhuǎn)移至液氮中。
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HB200710
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