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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·12年
Stubby UDI Primer Kit文庫構(gòu)建專用接頭試劑盒
| 參考價(jià): | ￥ 515 |
| 訂貨量: | 1臺(tái) |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- Stubby UDI Primer Kit 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：574更新時(shí)間：2023-02-16 14:07:27
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- www.yeasen.com
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 12×2 T |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 12404ES | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱
產(chǎn)品編號(hào)
規(guī)格
價(jià)格/元
*/元
Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina® (12 Index)文庫構(gòu)建專用接頭試劑盒是
12404ES01
12×2 T
515.00
489.00
Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina® (96 Index)文庫構(gòu)建專用接頭試劑盒是
12405ES01
96×2 T
4135.00
3928.00
Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina® (192 Index)文庫構(gòu)建專用接頭試劑盒是
12406ES01
192×1 T
8160.00
7743.84
Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina® (384 Index)文庫構(gòu)建專用接頭試劑盒是
12407ES01
384×1 T
16320.00
15487.68
產(chǎn)品描述
文庫構(gòu)建專用接頭試劑盒是Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina®是Illumina高通量測(cè)序平臺(tái)文庫構(gòu)建專用接頭試劑盒，包含二代測(cè)序建庫中使用的PE adapter以及12/96/192/384種UDI Primer。該試劑盒提供的UDI Primer為I5、I7 Primer預(yù)混液，配合DNA Library Prep Kit for Illumina®使用，可構(gòu)建多達(dá)384種雙端Index標(biāo)記的文庫。試劑盒中提供的所有試劑都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制和功能驗(yàn)證，上保證了文庫構(gòu)建的穩(wěn)定性和重復(fù)性。
產(chǎn)品組分
編號(hào)
名稱
規(guī)格
12404ES01
PE Adapter
84 μL
UDI Primer 0001-0012
10 μL each
12405ES01
PE Adapter
2×336 μL
UDI Primer 0001-0096
10 μL each
12406ES01
PE Adapter
2×336 μL
UDI Primer 0001-0192
5 μL each
12407ES01
PE Adapter
4×336 μL
UDI Primer 0001-0384
5 μL each
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。所有組分-20°C保存，有效期1年。
注意事項(xiàng)
1）本試劑盒中DNA Adapter的濃度為15 μM，單個(gè)文庫構(gòu)建的接頭使用量根據(jù)所用試劑盒進(jìn)行調(diào)整。
2）本試劑盒提供的PE Adapter為通用型短接頭，需要通過PCR擴(kuò)增獲得完整的文庫。UDI Primer提供Barcode序列標(biāo)簽，用于高通量測(cè)序時(shí)區(qū)分樣品。
3）本試劑盒有四種規(guī)格，分別提供12/96/192/384種UDI Primer，可以構(gòu)建多達(dá)384種雙端Index標(biāo)記文庫。
4）切勿加熱接頭，應(yīng)在室溫讓其緩慢溶解，實(shí)驗(yàn)室溫度最好設(shè)置為20-25°C。接頭避免反復(fù)凍融，建議分裝保存，可短暫存放于4°C。
5）使用Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina®試劑盒構(gòu)建的DNA文庫結(jié)構(gòu)如下：
6）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
7）本產(chǎn)品僅作科研用途！
使用方法
本試劑盒使用方法按照 Hieff NGS ® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina® 試劑盒操作說明進(jìn)行。
接頭連接 (Adapter Ligation)
在末端修復(fù)產(chǎn)物兩端連接特定的Illumina®接頭，即Hieff NGS® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina®操作步驟3.2。
1. 根據(jù)Input DNA量按照下表1選擇合適的Adapter用量；
表1 不同Input DNA推薦的Adapter使用濃度
Input DNA
Adapter : Input DNA摩爾比
推薦Adapter(15 μM)使用量
400 ng
30:1
3.5 μL
300 ng
40:1
3.5 μL
200 ng
60:1
3.5 μL
100 ng
100:1
3.0 μL
50 ng
100:1
1.5 μL
【注】：Input DNA 摩爾數(shù) (pmol)≈Input DNA質(zhì)量(ng)/[0.66×Input DNA平均長度 (bp)]
2. 將表2中的各種試劑解凍后顛倒混勻，置于冰上備用；
3. 配制表2所示反應(yīng)體系；
表2 Adapter Ligation反應(yīng)體系
名稱
體積 (μL)
dA-tailed DNA
60
Ligation Enhancer
30*
Quick T4 DNA Ligase
5
PE Adapter
x**
ddH2O
5-x
【注】：*Ligation Enhancer比較粘稠，請(qǐng)上下顛倒、振蕩，充分混勻并瞬時(shí)后離心使用。
**本公司接頭濃度 (Cat#12404；Cat#12405；Cat#12406；Cat#12407)與常規(guī)商業(yè)化試劑盒一致，皆為15 μmol/L。
4. 使用移液器輕輕吹打或振蕩混勻，并短暫離心將反應(yīng)液收集至管底；
5. 將PCR管置于PCR儀中，設(shè)置表3所示反應(yīng)程序，進(jìn)行接頭連接反應(yīng)：
表3 Adapter Ligation反應(yīng)程序
溫度
時(shí)間
熱蓋
Off
20°C
15 min
4°C
Hold
【注】：當(dāng)Input DNA量較低，實(shí)驗(yàn)效果不理想時(shí)，可嘗試將連接時(shí)間延長一倍。
連接產(chǎn)物磁珠純化 (Post Ligation Clean Up)
該步驟使用磁珠對(duì)連接產(chǎn)物進(jìn)行純化或分選。純化可除去未連接的Adapter或Adapter Dimer等無效產(chǎn)物，分選可篩選特定長度DNA片段以符合測(cè)序需要，詳細(xì)操作步驟參照Hieff NGS® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina®建庫試劑盒說明書。
文庫擴(kuò)增 (Library Amplification)
該步驟將對(duì)純化或長度分選后的接頭連接產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增富集，使用本試劑盒接頭時(shí)，該步驟為必做步驟；
1. 將表4中試劑解凍后顛倒混勻，置于冰上備用；
2. 于無菌PCR管中配制表4所示反應(yīng)體系；
表4 PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系
名稱
體積 (μL)
2× Super Canace® II High-Fidelity Mix
25
UDI Primer
5
Adapter Ligated DNA
20
【注】：文庫擴(kuò)增引物來自Yeasen接頭引物試劑盒 (Cat#12404；Cat#12405；Cat#12406；Cat#12407)。
3. 使用移液器輕輕吹打或振蕩混勻，并短暫離心將反應(yīng)液收集至管底；
4. 將PCR管置于PCR儀中，設(shè)置表5所示反應(yīng)程序，進(jìn)行PCR擴(kuò)增：
表5 PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序
溫度
時(shí)間
循環(huán)數(shù)
98°C
1 min
1
98°C
10 sec根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要調(diào)整
60°C
30 sec
72°C
30 sec
72°C
5 min
1
4°C
Hold
-
HB210809
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