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基因組DNA抽提

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更新時間:2024-05-13 13:22:22瀏覽次數(shù):2371

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產(chǎn)品簡介

基因組DNA抽提,可以抽提動物組織、鼠尾、培養(yǎng)細胞、細菌、酵母、動物血液、昆蟲以及固定組織的包括基因組DNA在內(nèi)的總DNA。通過試劑盒說明書中提供的不同操作方法,幾乎可以抽提所有樣品中的總DNA。

詳細介紹

基因組DNA抽提:

    通過基因組DNA抽提試劑盒可以抽提動物組織、鼠尾、培養(yǎng)細胞、細菌、酵母、動物血液、昆蟲以及固定組織的包括基因組DNA在內(nèi)的總DNA。通過試劑盒說明書中提供的不同操作方法,可以抽提除植物樣品外的幾乎所有樣品中的總DNA。

步驟:
    樣品首先被蛋白酶K消化,隨后加入適合DNA結(jié)合到純化柱上的緩沖液,然后加入到純化柱內(nèi)。通過高速離心,使DNA在穿過純化柱的瞬間,結(jié)合到純化柱上,隨后通過兩次洗滌去除各種雜質(zhì),zui后通過洗脫液把DNA洗脫下來。整個過程無需酚氯仿抽提,無需酒精沉淀,樣品裂解后僅需約15分鐘即可完成。

效率:
   1. 通過試劑盒純化得到的基因組DNA的長度zui長可達50kb左右,平均為30kb左右,zui短為100bp的DNA也可以被純化。如需獲得更長的基因組DNA,對于哺乳動物樣品,包括組織或細胞等,可以使用特定的試劑盒抽提。
    2.通過試劑盒獲得的總DNA,OD260/OD280的范圍通常在1.7至1.9之間。
    3.試劑盒可以抽提少至數(shù)百個細胞,多至25mg組織、0.5-1cm鼠尾、500萬個培養(yǎng)細胞、20億個細菌或5000萬個酵母。

     4.樣品用量過多,反而會影響抽提效果。如果待抽提樣品的DNA含量小于5ng,建議加入適當量的carrier DNA,例如poly-dT或其它對后續(xù)實驗沒有干擾的DNA,也可以加入適當量的carrier RNA,例如yeast RNA等,以改善抽提效果。
    5.試劑盒的標準操作步驟抽提得到的總DNA會含有少量RNA,但如果按照一般的試劑盒可選步驟加入RNase A,就可以獲得不含RNA的高純度總DNA。含有RNA的總DNA可以用于PCR,但對于某些其它的后續(xù)反應可能會產(chǎn)生一些影響。


 DNA抽提時樣本抽提的范圍:  

    純化柱對于DNA的zui大容量約為30微克。通常每200萬Hela細胞或500萬淋巴細胞可以抽提得到15-25微克總DNA,每25mg肝、腦、腎組織可以抽提得到10-30微克總DNA,每25毫克心、肺組織可以抽提得到5-10微克總DNA,每10mg脾組織可以抽提得到5-30微克總DNA,每1.2cm小鼠尾尖或0.3cm大鼠尾尖可以獲得10-25微克總DNA。
    
DNA抽提小量試劑盒包裝清單:

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

包裝

D-1

樣品裂解液A

10ml

D-2

樣品裂解液B

11ml

D-3

洗滌液I

21ml (*次使用前加入7ml無水乙醇)

D-4

洗滌液II

16ml (*次使用前加入24ml無水乙醇)

D-5

洗脫液

22ml

D-6

蛋白酶K

1.1ml

DNA純化柱

50個

廢液收集管

50個

說明書

1份

保存條件:
    蛋白酶K-20℃保存,其余均室溫保存。一年有效。蛋白酶K室溫(15-25℃)存放一周,活力無明顯下降。


DNA抽提注意事項:
    1.抽提細菌、酵母樣品時還需要一些特定的試劑,詳情請參考相關實驗步驟。
    2.如需制備不含RNA的高純度總DNA,需自備RNase A。
    3.溫度較低時樣品裂解液A或樣品裂解液B中可能會有沉淀產(chǎn)生,屬正?,F(xiàn)象。使用前必須檢查一遍。如有沉淀,55℃水浴孵育使沉淀溶解,混勻后使用。
   4.*次使用前洗滌液I需添加7ml無水乙醇,洗滌液II需添加24ml無水乙醇,混勻,并在瓶上做好標記。
    5.試劑盒需使用55℃水浴,請?zhí)崆白骱脺蕚洹?br />    6.除特別說明外,每次Vortex應控制在5-10秒左右。
    7.試劑盒所有操作均在室溫進行,操作時無需冰浴。所有離心也均在室溫進行。
    8.廢液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丟棄。
    9.參考使用說明,從某些樣品中抽提總DNA不需要使用樣品裂解液A。 
    10.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 

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