化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
DNA抽提和純化主要是CTAB方法，其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法?；瘜W方式如異硫氰酸胍法、堿裂解法。生物方式：酶法。根據(jù)核酸分離純化方式的不同有；硅質材料、陰離子交換樹脂等。
DNA抽提和純化總的原則：
1、保證核酸一級結構的完整性；
2、核酸樣品中不應存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子；
3、其他生物大分子如蛋白質、多糖和脂類分子的污染應降低到zui低程度。
方法介紹：
一、酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎細胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小為100-150kb
二、甲酰胺解聚法：破碎細胞同上，然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質與DNA的結合，再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。
三、玻璃棒纏繞法：用鹽酸胍裂解細胞，將裂解物鋪于乙醇上，然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪，DAN沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。
四、異丙醇沉淀法：基本同1法，僅用二倍容積異丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在異丙醇中可溶狀態(tài)）
五、表面活性劑快速制備法：用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。
六、加熱法快速制備：加熱96℃-100℃，五分鐘，然后離心后取上清，可用于PCR反應。
七、堿變性快速制備：先用NaOH作用20分鐘，再加HCI中和，離心后取上清，含少量DNA。
化工儀器網(wǎng)