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詳細(xì)介紹
腺病毒（Adenovirus）是目前可靠的重組病毒表達(dá)系統(tǒng)之一，可用于在哺乳細(xì)胞中瞬時(shí)及高水平地表達(dá)shRNA或目的蛋白。其具備以下優(yōu)點(diǎn)：
1. 宿主范圍廣。腺病毒可感染一系列哺乳動(dòng)物細(xì)胞，除可感染幾乎所有人的細(xì)胞類型外，還可感染包括大鼠、小鼠、兔、豬、羊、猴、雞等物種。
2. 因腺病毒的感染不依賴細(xì)胞周期，故其既可以感染增殖細(xì)胞也可以感染非增殖細(xì)胞。
3. 腺病毒具有嗜上皮細(xì)胞特性，因大多數(shù)腫瘤細(xì)胞均屬于上皮細(xì)胞，這使得腺病毒非常適合應(yīng)用于基因治療領(lǐng)域。
4. 病毒滴度高，可用于動(dòng)物水平的實(shí)驗(yàn)。
5. 有較好的生物安全性。腺病毒攜帶的基因不會(huì)整合到宿主細(xì)胞基因組中；實(shí)驗(yàn)中雖然會(huì)有一定機(jī)率出現(xiàn)RCA（即復(fù)制型腺病毒），但由于大多數(shù)成人體內(nèi)都有針對(duì)腺病毒的抗體，所以一般危害不大。
技術(shù)要點(diǎn)
重組腺病毒的包裝制備：重組腺病毒是從由侵染色斑組成單位（pfu）中分離獲得的。一個(gè)單色斑是線性載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后在20×15 cm板上由293A細(xì)胞連續(xù)侵染后被挑選和擴(kuò)增形成的。重組腺病毒可通過(guò)超速離心純化，并測(cè)定滴度及進(jìn)行PCR鑒定。純化后重組腺病毒的滴定濃度為1010pfu/ml，獲得的量為2-4 ml。
重組腺病毒的特性：一般的，單個(gè)腺病毒通常是在30×150mm細(xì)胞培養(yǎng)皿中制備的。
獲得量：1×10病毒顆粒/細(xì)胞
滴定濃度：1×1010～1×1012個(gè)病毒基因組/ml
zui終體積：1 ml純化后的病毒液（儲(chǔ)存于PBS）
儲(chǔ)存：批量?jī)?chǔ)存的*條件為-80°C
幾種病毒載體的區(qū)別：
| 腺病毒表達(dá)系統(tǒng) | 慢病毒表達(dá)系統(tǒng) | 逆轉(zhuǎn)錄病毒 | |
| 病毒基因組成 | 雙鏈DNA | 單鏈RNA | 單鏈RNA |
| 載導(dǎo)容量 | < 8 kb | < 8 kb | < 6kb |
| 基因整合功能 | 無(wú)。病毒基因組游離于宿主基因組外，瞬時(shí)表達(dá)外源基因 | 有。病毒基因組整合于宿主基因組，長(zhǎng)時(shí)間、穩(wěn)定表達(dá)外源基因 | 有。 |
| 表達(dá)豐度 | 高水平表達(dá) | 中 | 中 |
| 表達(dá)時(shí)間 | 快(1-2天) | 慢（2-4天） | 快（1-2天） |
| 感染細(xì)胞類型 | 分裂和不分裂細(xì)胞 | 分裂和不分裂細(xì)胞。適用于難轉(zhuǎn)染細(xì)胞 | 感染分裂細(xì)胞，但在干細(xì)胞中表達(dá)效率低 |
| 滴度TU/ml | 10^12 | 10^9 | 10^9 |
| 四環(huán)素誘導(dǎo)系統(tǒng) | 不可以 | TET-ON , TET-OFF | 不可以 |
| 毒性作用 | 細(xì)胞毒性 | 遺傳毒性 | 遺傳毒性 |
| 免疫原性 | 高免疫原性 | 低免疫原性 | 低免疫原性 |
| 動(dòng)物模型 | 不能得到轉(zhuǎn)基因動(dòng)物 | 可產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，效率達(dá)50以上 | 可以，但很難 |
| 安全系數(shù) | 高 | 高 | 中 |
| 能否用于MIRCORNA | 可以 | 可以 | 不可以 |
| RNAi | 病毒進(jìn)入細(xì)胞往往引起細(xì)胞內(nèi)干擾素反應(yīng)，不適合做RNAi實(shí)驗(yàn) | 適合，是RNAi實(shí)驗(yàn)的優(yōu)選工具 | 可以用作RNAi實(shí)驗(yàn) |
| 基因過(guò)表達(dá) | 包裝容量較大?？梢詽M足較大基因的包裝，是過(guò)表達(dá)基因的優(yōu)選工具 | 包裝容量有限，過(guò)表達(dá)的基因過(guò)大時(shí)，病毒滴度受到影響 | 包裝容量有限，過(guò)表達(dá)的基因過(guò)大時(shí)，病毒滴度受到影響 |
| 常見(jiàn)應(yīng)用 | 1、體外細(xì)胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)2、基因治療 | 1、體外細(xì)胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)2、基因治療 |
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