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上海信裕生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第11年

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應(yīng)用CRISPR-Cas9實(shí)現(xiàn)斑馬魚組織特異性基因敲除

時(shí)間:2015-3-27閱讀:704
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近日,來自美國哈佛大學(xué)的研究人員在學(xué)術(shù)期刊Development cell發(fā)表了他們的研究進(jìn)展,他們利用基于CRISPR-Cas9技術(shù)開發(fā)的載體系統(tǒng)在斑馬魚上實(shí)現(xiàn)了組織特異性基因敲除,這對(duì)于以斑馬魚為主要研究工具的科學(xué)家們無疑是一個(gè)好消息。

斑馬魚具有養(yǎng)殖方便、繁殖周期短、產(chǎn)卵量大、胚胎體外受精、體外發(fā)育、胚體透明等特點(diǎn),是生命科學(xué)研究中一種重要的模式生物和研究平臺(tái)。利用斑馬魚,可以研究生命科學(xué)的基礎(chǔ)問題,揭示胚胎和組織器官發(fā)育的分子機(jī)理;可以構(gòu)建人類的各種疾病和腫瘤模型,建立藥物篩選和治療的研究平臺(tái);可以建立毒理學(xué)和水產(chǎn)育種學(xué)模型,研究和解決環(huán)境科學(xué)和農(nóng)業(yè)科學(xué)的重大問題。

CRISPR/Cas9技術(shù)作為基因編輯工具目前已在多個(gè)平臺(tái)和系統(tǒng)得到廣泛應(yīng)用,大大方便了在體內(nèi)和體外對(duì)靶向基因進(jìn)行敲除操作。在該研究中,研究人員開發(fā)了一種基于CRISPR-Cas9技術(shù)的載體系統(tǒng),在斑馬魚上實(shí)現(xiàn)了組織特異性基因敲除。他們?cè)诎唏R魚中,應(yīng)用CRISPR/Cas9技術(shù)在單細(xì)胞胚胎階段通過簡單地注射導(dǎo)向RNA(gRNA)和Cas9 mRNA快速獲得基因敲除斑馬魚。為證明該項(xiàng)技術(shù)的可應(yīng)用性,研究人員構(gòu)建了攜帶gata1啟動(dòng)子的載體,驅(qū)動(dòng)Cas9表達(dá),在紅細(xì)胞中特異性敲除了參與血紅素合成的urod基因。通過靶向Urod基因,研究人員在斑馬魚胚胎中觀察到攜帶紅色熒光的紅細(xì)胞,重復(fù)了在yquem突變的斑馬魚中觀察到的表型。雖然F0代胚胎中出現(xiàn)鑲嵌基因中斷,但在F1代斑馬魚中,這種表型非常明顯。

這套基于CRISPR的載體系統(tǒng)為在斑馬魚上實(shí)現(xiàn)組織特異性基因敲除提供了一種便捷的方法,大大拓寬了在斑馬魚中進(jìn)行功能缺失的研究范圍,具有重要意義。xyA122Ra 大鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(SDF1)ELISA試劑盒
xyA119Ra 大鼠CD40配體(CD40L)ELISA試劑盒
xyA116Ra 大鼠調(diào)節(jié)激活正常T-細(xì)胞表達(dá)分泌因子(RANTES)ELISA試劑盒
xyA114Ra 大鼠胎盤生長因子(PLGF)ELISA試劑盒
xyA110Ra 大鼠抑瘤素M(OSM)ELISA試劑盒
xyA109Ra 大鼠肌肌酸激酶(CKM)ELISA試劑盒
xyA108Ra 大鼠骨保護(hù)素(OPG)ELISA試劑盒
xyA104Ra 大鼠膽囊收縮素A受體(CCKAR)ELISA試劑盒
xyA103Ra 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶8(MMP8)ELISA試劑盒
xyA102Ra 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP7)ELISA試劑盒
xyA101Ra 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP3)ELISA試劑盒
xyA100Ra 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP2)ELISA試劑盒
xyA099Ra 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)ELISA試劑盒
xyA098Ra 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)ELISA試劑盒
xyA097Ra 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP1)ELISA試劑盒
xyA096Ra 大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3β(MIP3β)ELISA試劑盒
xyA093Ra 大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β(MIP1β)ELISA試劑盒
xyA092Ra 大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α(MIP1α)ELISA試劑盒
xyA091Ra 大鼠巨噬細(xì)胞來源趨化因子(MDC)ELISA試劑盒
xyA090Ra 大鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子(MCSF)ELISA試劑盒
xyA089Ra 大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白3(MCP3)ELISA試劑盒
xyA087Ra 大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP1)ELISA試劑盒
xyA086Ra 大鼠L選擇素(HZLL)ELISA試劑盒
xyA085Ra 大鼠白血病抑制因子(LIF)ELISA試劑盒
xyA084Ra 大鼠瘦素(LEP)ELISA試劑盒
xyA083Ra 大鼠瘦素受體(LEPR)ELISA試劑盒
xyA078Ra 大鼠白介素5(IL5)ELISA試劑盒
xyA076Ra 大鼠白介素3(IL3)ELISA試劑盒
xyA069Ra 大鼠N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGaHZ)ELISA試劑盒
xyA066Ra 大鼠白介素1受體Ⅰ(IL1R1)ELISA試劑盒
xyA065Ra 大鼠白介素1受體Ⅱ(IL1R2)ELISA試劑盒
xyA063Ra 大鼠白介素17(IL17)ELISA試劑盒
xyA062Ra 大鼠白介素16(IL16)ELISA試劑盒
xyA061Ra 大鼠白介素15(IL15)ELISA試劑盒
xyA060Ra 大鼠白介素13(IL13)ELISA試劑盒

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