使用小鼠防御素β1(DEFβ1)ELISA試劑盒檢測過程中值得關注的問題

濃縮：由于凈化過程中引入的溶劑，可能會降低待測組分的濃度或者不適宜直接分析，需要去除全部有機溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮氣下吹干，再用復溶液溶解干燥殘留物。

濃縮方式：氮氣吹干除雜、壓縮空氣吹干除雜。

注意：1在吹干樣本之前，用甲醇清洗針頭，防止雜質干擾。2在吹樣本時，針頭應在液面上空，避免與樣本接觸，防止產生交叉污染。3樣本吹干后應立即取下，避免吹的時間過長，影響zui終檢測結果。4不同的藥物，吹干后樣本的保質期不同，提倡待樣本回到室溫后立即復溶。5 凈化：經過提取的待測組分中通常含有一些會干擾試劑盒中抗原抗體反應的雜質或者是含有與待測物結構相似的雜質。將待測組分與雜質分離的過程，我們稱為小鼠防御素β1(DEFβ1)ELISA試劑盒中樣本的凈化。在我們現有的試劑盒前處理方法中涉及到的zui常見的凈化是：液液分配法。

比如：用復溶液溶解干燥殘留物之前先加入適量的正己烷，在加入正己烷和復溶液渦動后如果出現乳化現象，可以60℃水浴加熱，至乳化現象消失或減弱后，加大離心轉速進行離心。

實例：

A、氟喹諾酮類藥物試劑盒現有的水產樣本前處理方法中，用二氯甲烷作為提取劑。

注意：

 (a)二氯甲烷的密度比水大，離心完后，二氯甲烷在下層，須先用加樣器吸盡上層廢液后，再按要求取適量的下層吹干。

 (b)在用加樣器吸取下層的有機相時，正常操作往往取量不準確，此時用帶有刻度，且刻度較準確的玻璃管來定量。

 (c)上訴情況對有經驗的試驗員還可以通過靈活控制加樣器來控制取樣的準確性。

 (d)在振蕩過程中要注意安全。二氯甲烷在振蕩的過程中，如果離心管密封性不是很好，往往容易爆開；在進行振蕩時，不要讓離心管口對準自己或者其他人，避免濺到自己或者他人身上。

 (e)小鼠防御素β1(DEFβ1)ELISA試劑盒在使用前充分回溫很必要，如回溫不充分該項目曲線受影響較明顯。

B、硝基呋喃代謝物檢測過程中常見問題

 硝基呋喃代謝物有四種：3-氨基-2-唑烷基酮(AOZ)、5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ)、氨基脲(SEM)和1-氨基-2-內酰脲(AHD)在檢測過程中也需要同其它項目一樣進行添加回收測評，其中需要注意以下幾個問題。

  代謝物在組織中是與蛋白呈結合狀態(tài)，采用普通的有機溶劑或緩沖液，是無法提取該代謝物的。需要用鹽酸水解后才能使呋喃類代謝物游離，所以在加入去離子水、鹽酸和2-硝基苯甲醛(2-NBA)混合均勻后，其pH應在1-3之間，否則不利用水解代謝物。

在衍生化過程中，溫度和時間決定其衍生化產率，衍生化后在加入氫氧化鈉和磷酸氫二鉀時，其pH應在中性左右。由于部分樣本的緩沖能力不同，所以需對其pH進行測定，因為在酸性或堿性環(huán)境中，不利于呋喃類代謝物的提取回收，同時也容易出現假陽性。

小鼠防御素β1(DEFβ1)ELISA試劑盒結果判斷定性測定 

  定性測定的結果判斷是對受檢標本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答，分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標本在該測定系統中有反應。"陰性"則為無反應。用定性判斷法也可得到半定量結果，即用滴度來表示反應的強度，其實質仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中，將標本作一系列稀釋后進行試驗，呈陽性反應的zui高稀釋度即為滴度。根據滴度的高低，可以判斷標本反應性的強弱，這比觀察不稀釋標本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性更具定量意義。

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