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內毒素檢測：從凝膠法到動態(tài)法
閱讀：588 發(fā)布時間：2022-9-16
◆內毒素檢測的意義
內毒素在環(huán)境中無處不在，主要在細菌裂解過程中由革蘭氏陰性菌的外膜釋放。若細菌內毒素通過腸胃外途徑進入人體，可能會導致發(fā)生炎癥、感染性休克、出血甚至死亡1。此外，在研究應用中，內毒素污染會導致研究結果不準確并有可能產生誤導性的解釋。因此，內毒素檢測已成為注射藥物和醫(yī)療器械開發(fā)及質量控制的重要組成部分。
◆鱟試劑（LAL）檢測，內毒素檢測的良好選擇
目前已有多種內毒素檢測方法。其中，鱟試劑檢測法（LAL）被確立為內毒素檢測的金標準試驗2，3。LAL檢測依賴于從鱟血液中提取的蛋白與樣品孵育、反應從而分析內毒素含量。如果所測樣品含有內毒素，LAL中的促凝血酶會與其發(fā)生相互作用，導致凝血級聯反應的激活、變形細胞凝血原的修飾以及凝膠的形成，這被稱為凝膠法。對形成的凝膠可進行目視定性評估。雖然凝膠法靈敏且方便，但無法進行內毒素定量檢測和高通量分析。因此，人們開始關注定量的LAL檢測法。
◆動態(tài)鱟試劑檢測的發(fā)展及優(yōu)勢
動態(tài)LAL檢測具有顯著優(yōu)勢，其可在廣泛的濃度范圍內定量內毒素含量并實現自動化分析，減少與用戶有關的檢測差異。內毒素定量可通過濁度（濁度法）或反應混合物的顏色變化（顯色法）進行評估。濁度法和顯色法均可以動態(tài)法或終點檢測法的方式進行檢測。
濁度法
動態(tài)濁度法鱟試劑PYROSTAR™ ES-F
濁度法可評估酶底物裂解后及凝膠形成前發(fā)生的濁度（渾濁）形成。使用分光光度計或酶標儀對濁度進行定量。濁度法可靠、靈敏且支持高通量分析。
顯色法
動態(tài)顯色法鱟試劑Limulus Color KY
顯色法的原理為鱟試劑使顯色底物裂解，從而導致發(fā)色團的釋放。然后，使用光度計對顯色反應進行定量。顯色法靈敏度高，可實現自動內毒素測量和高通量分析。
◆基于重組因子的定量分析
重組三因子鱟試劑PYROSTAR™ Neo
除了以上方法，內毒素的定量檢測還有重組C因子或多因子的檢測法。所使用的重組因子，包含了誘導內毒素的鱟凝血級聯反應中的一種或多種蛋白4。
◆變更為動態(tài)LAL檢測的注意事項
LAL檢測已被廣泛接受為內毒素檢測的標準測試2，3。盡管LAL檢測的所有變化都是靈敏、可靠的，但定量LAL檢測和基于重組因子C的檢測法，由于可提供定量和高通量內毒素的檢測而越來越受歡迎。為內毒素檢測選擇合適的定量分析方法時5，應綜合考慮分析樣品的性質和特點、可用設備以及可能相關的法規(guī)要求等多種因素。
◆文獻來源
[1] Sampath VP. Bacterial endotoxin-lipopolysaccharide; structure, function and its role in immunity in vertebrates and invertebrates. Agriculture and Natural Resources 2018;52:115–120. https://doi.org/10.1016/j.anres.2018.08.002.
[2] Wheeler, A. Comparing endotoxin detection methods. Pharmaceutical Technology 2017;41:58–62.
[3] Mehmood, Y. What Is Limulus amebocyte lysate (LAL) and its applicability in endotoxin quantification of
pharma products. Growing and Handling of Bacterial Cultures. IntechOpen 2019.
Doi:10.5772/intechopen.81331.
[4] Suvarna, K. Endotoxin detection methods – Where are we now? American Pharmaceutical Review. 2015,
August 25.
[5] Wong J, Davies N, Jeraj H, Vilar E, Viljoen A, Farrington K. A comparative study of blood endotoxin detection in
haemodialysis patients. Journal of Inflammation (London) 2016;13:24. doi: 10.1186/s12950-016-0132-5.
◆相關產品
內毒素檢測系統Toxinometer® ET-7000
PYROSTAR™ ES-F 系列動態(tài)濁度法鱟試劑
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PYROSTAR™ Neo重組鱟試劑