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偶氮聚合物引發(fā)劑

一個(gè)世紀(jì)以來(lái)，生物學(xué)家們一直夢(mèng)想著能夠透過(guò)器官甚至整個(gè)機(jī)體，親眼看到細(xì)胞連接和精細(xì)結(jié)構(gòu)，現(xiàn)在隨著組織透明化技術(shù)的完善，這一夢(mèng)想終于成為了現(xiàn)實(shí)。

◆原理

VA-044 作為組織透明化技術(shù)中起關(guān)鍵作用的水溶性偶氮引發(fā)劑，普遍適用于高分子合成的水溶液聚合與乳液聚合。在CLARITY 方法中，VA-044 作為引發(fā)劑，催化丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺和PFA 形成水凝膠。

2013 年3 月，斯坦福大學(xué)的Karl Deisseroth 博士的團(tuán)隊(duì)在自然雜志上發(fā)表了Structural and molecularinterrogation of intact biological systems 的論文，文中介紹了制備組織的方法CLARITY。該方法是將組織浸透在水凝膠單體溶液中中，經(jīng)電泳使組織呈現(xiàn)透明。這種水溶膠—組織雜交的方式可以維持組織的原有結(jié)構(gòu)，使生物分子結(jié)合到水凝膠的網(wǎng)孔上。重要的是脂類不會(huì)結(jié)合到水凝膠上，因而可以通過(guò)這種方式將脂類有效去除。通過(guò)這種方法制備的組織樣品可用于后期的影像實(shí)驗(yàn)，免疫染色，原位雜交等實(shí)驗(yàn)。

CLARITY可用于熒光蛋白質(zhì)和抗體的免疫染色，可作為解析腦神經(jīng)回路的有效工具。VA-044是論文實(shí)驗(yàn)步驟中透明化工程的使用試劑。

◆特點(diǎn)• 優(yōu)勢(shì)

●操作簡(jiǎn)單，固定蛋白后只需進(jìn)行電泳；

●可保持組織、器官和全身結(jié)構(gòu)的完整性；

● 可進(jìn)行原位雜交和免疫組化實(shí)驗(yàn)，可進(jìn)行多輪染色和脫色步驟；

◆案例•應(yīng)用

Clarity 介紹

PARS 介紹

2014 年7 月，加州理工學(xué)院的研究團(tuán)隊(duì)在細(xì)胞雜志上發(fā)表論文Single-Cell Phenotyping within TransparentIntact Tissue through Whole-Body Clearing，將CLARITY 技術(shù)推進(jìn)到一個(gè)新的高度——全身組織透明化技術(shù)，稱為PARS。這種技術(shù)將透明劑持續(xù)泵入動(dòng)物的循環(huán)系統(tǒng)從而進(jìn)入各個(gè)組織，或者通過(guò)腦脊液管道泵入大腦，再去除脂質(zhì)，使器官和生物體被高分子滲透而呈現(xiàn)透明，并可用熒光抗體分析和揭示具有完整連接性的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和三維細(xì)胞排列。

CLARITY處理的小鼠腦

CLARITY處理的小鼠大腦成像

CLARITY處理的Thy1-YFP（H Line）小鼠大腦的熒光觀察
（A）從大腦皮質(zhì)到海馬的3-D觀察圖像
（B）大腦皮層Ⅴ層的錐體細(xì)胞的樹(shù)突圖像
拍攝條件：雙光子   使用設(shè)備：Olympus FV1000直立顯微鏡，25倍浸液物鏡

CLARITY+抗體處理的小鼠大腦成像

CLARITY處理后，用Iba1抗體染色Thy1-YFP（H線）小鼠大腦的熒光觀察
（A）在大腦皮質(zhì)的小膠質(zhì)細(xì)胞的3-D觀察圖像
（B）從表面層觀察皮質(zhì)Ⅰ層的圖像
拍攝條件：?jiǎn)喂庾?span style="font-family:微軟雅黑,microsoft yahei">   使用設(shè)備：Olympus FV1000直立顯微鏡，25倍浸液物鏡

偶氮聚合物引發(fā)劑

◆相關(guān)資料

VA-044(聚合物引發(fā)劑）	CLARITY電泳儀器	CLARITY_Protocol
文獻(xiàn)驗(yàn)證可與Wako透明化試劑配合使用的抗體列表	組織透明化試劑系列

◆相關(guān)產(chǎn)品

CLARITY 步驟

水凝膠單體溶液組成

●VA-044············1 g
●40％的丙烯酰胺······40 mL
●2％雙丙烯酰胺·····10 mL
●10×PBS···········40 mL
●16％多聚甲醛·····100 mL

●皂素···········200 mL

●水··············210 mL

電泳緩沖液

●硼酸...123.66 g
●SDS····400 g
●NaOH···調(diào)制至pH8.5

●水·····定容至10 L

●Electrophoresis Chamber For Lipid Extraction

循環(huán)泵

●GPU-1,GPU-2（AS版）

CLARITY試劑列表