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詳細(xì)介紹
賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶，MS級(jí)
本產(chǎn)品是質(zhì)譜分析前處理時(shí)常用的蛋白分解酶即賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶，該酶可以特異性切除賴(lài)氨酸基團(tuán)C末端的多肽，可用于蛋白測(cè)序分析和Lys-X化合物的酶合成。若同時(shí)使用賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶和胰酶，可更好地切斷賴(lài)氨酸 基團(tuán)的多肽，增加多肽的數(shù)量。產(chǎn)品已按照使用習(xí)慣做成小包裝，是方便使用的冷凍干燥品。
來(lái)源：細(xì)菌
外觀：凍干粉（包含2mmol/L Tris-HCl緩沖液，pH8）
活性：0.03～0.07AU/vial
分子量：27,000(瓊脂糖過(guò)濾)，30,000（SDS-PAGE）
溶解性：溶于水或緩沖液
穩(wěn)定性：溶解于pH值5.0-12.0的Tris緩沖液中，可在4℃穩(wěn)定保存2年；在pH值6.0-11.0 30℃時(shí)能穩(wěn)定保存，但溫度超過(guò)50℃時(shí)不穩(wěn)定。
適pH值：9.0~9.5
等電點(diǎn)：6.9~7.0
底物特異性：
可水解底物——Tos-Lys-OMe,Bz-Lys-NH2,Bz-Lys-pNA,Lys-pNA
不可水解底物——Bz-Arg-NH2,Bz-Arg-pNA,Arg-pNA
抑制劑：DFP，PMSF，TLCK
◆特點(diǎn)
●高特異性、高蛋白質(zhì)消化率、適用于蛋白質(zhì)譜分析
●提高裂解效率、增加肽段數(shù)量
●根據(jù)使用量特意制備小包裝，方便使用
◆應(yīng)用
分別采用胰蛋白酶(Tp)、賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶 (Lys-C) 和Tp與Lys-C聯(lián)用進(jìn)行膠內(nèi)酶切的效果比較。
牛血清蛋白BSA 的條帶(100ng) 通過(guò)SDS-PAGE 獲得，然后分別用Tp、Lys-C和Lys-C+Tp進(jìn)行酶切，再用MALDI-TOFMS法進(jìn)行分析。
這些蛋白酶的實(shí)驗(yàn)效果見(jiàn)下表。
表1：Tp、Lys-C和Lys-C+Tp的結(jié)果對(duì)照
這些結(jié)果表明Lys-C酶解的錯(cuò)誤裂解率低。Tp酶解時(shí)加入Lys-C后，錯(cuò)誤裂解率有所降低，同時(shí)，可以鑒定出更多的多肽。
Tp | Lys-C | Lys-C+Tp | |
裂解位點(diǎn) | 精氨酸和賴(lài)氨酸的C端 | 賴(lài)氨酸的C端 | 精氨酸和賴(lài)氨酸的C端 |
錯(cuò)誤裂解率 (錯(cuò)誤裂解所占比例) | 多(8%) | 很少(0%) | 少(3%) |
鑒定出的多肽數(shù)量 | 17 | 19 | 22 |
胰蛋白酶 (Tp)( 圖 a) 和賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶 (Lys-C)+Tp ( 圖 b) 酶切后的質(zhì)譜結(jié)果對(duì)照?qǐng)D。
Lys-C+Tp酶切后，可以在m/z=2000時(shí)得到吸收峰，而單獨(dú)的Tp酶切在m/z=2000時(shí)沒(méi)有吸收峰。該結(jié)果表明Lys-C可以提高測(cè)序覆蓋度。
( 數(shù)據(jù)由大阪醫(yī)療中心和婦嬰健康研究所Y. Wada博士提供 )
賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶
賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶，初由Masaki 等人從土壤細(xì)菌中分離得到。該酶可以特異性剪切賴(lài)氨酸殘基C 末端和S-氨乙基半胱氨酸殘基的肽鍵，用于蛋白測(cè)序和Lys-X 化合物的酶催化合成。該酶穩(wěn)定性高，在4M 尿素或0.1%SDS 溶液中30℃孵育6小時(shí)之后，仍然擁有完整的生物活性。
外觀 | 凍干粉（包含ca. 10% Tris-HCl buffer，pH8） | 活性 | 見(jiàn)包裝 |
分子量 | 27,000（凝膠過(guò)濾）；30,000 (SDS-PAGE) | 溶解性 | 易溶于水或緩沖液 |
·佳pH | 9.0-9.5（酰胺酶的·佳活性pH） | 等電點(diǎn) | 6.9-7.0 |
抑制劑 | DFP、PMSF、TLCK | 來(lái)源 | 細(xì)菌 |
穩(wěn)定性 | 溶于pH 值5.0-12.0的緩沖液中，可于4℃穩(wěn)定保存。溶于pH值6.0-11.0的緩沖液中，可于30℃穩(wěn)定保存，但是50℃及以上不穩(wěn)定。 | ||
單位定義 | 一單位酰胺酶(AU) 指在30℃ pH9.5 時(shí)每分鐘產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基苯胺所需的酶量。 | ||
底物特異性 | 水解底物：Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA | ||
非水解底物：Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA | |||
◆產(chǎn)品列表
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 包裝 |
| 125-05061 | 賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶，MS級(jí) | 質(zhì)譜級(jí) | 20μg×5 |