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詳細(xì)介紹
LabAssay™ Cholesterol
LabAssay™ 膽固醇檢測(cè)試劑盒
血清中的膽固醇濃度與肝臟和腸道中的膽固醇生成、吸收、分解代謝及血液中的脂蛋白代謝密切相關(guān)。本產(chǎn)品為基于N-乙基-N-（2-羥基-3-磺丙基）-3,5-二甲氧基苯胺鈉（DAOS）的藍(lán)色顯色酶法試劑。微孔板法可用于測(cè)定小鼠、人血清中的總膽固醇。
◆檢測(cè)原理
顯色試劑作用于樣品后，樣品中的膽固醇酯類被膽固醇酯酶分解為游離的膽固醇和脂肪酸。生成的膽固醇與原有的游離膽固醇共同被膽固醇氧化酶氧化，同時(shí)產(chǎn)生過(guò)氧化氫。生成的過(guò)氧化氫在過(guò)氧化物酶（HRP）的作用下，使得DAOS和4-氨基安替比林進(jìn)行定量氧化縮合，生成藍(lán)色色素。通過(guò)測(cè)定這種藍(lán)色色素的吸光度，可計(jì)算出樣品中總膽固醇的濃度。
◆試劑盒組成
１．緩沖液——150 mL×1瓶
２．顯色劑——150 mL用×1瓶
３．標(biāo)準(zhǔn)液——5 mL×1瓶
◆試劑盒性能
● 標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍：50～592.2 mg/dL（mg/100 mL）
● 測(cè)定時(shí)間：約10 min
● 樣品：血清、血漿（小鼠、大鼠、人）
● 所需樣品量：2 μL
● 測(cè)定波長(zhǎng)：主波長(zhǎng)600 nm、副波長(zhǎng)700 nm
◆標(biāo)準(zhǔn)曲線示例
◆檢測(cè)操作方法
微孔板法
根據(jù)下表?xiàng)l件，在孔板內(nèi)進(jìn)行反應(yīng)。
Tests | 標(biāo)準(zhǔn) | 空白 | |
顯色劑 | 300 μL | 300 μL | 300 μL |
待測(cè)物 | 樣品 2 μL | 標(biāo)準(zhǔn)溶液 2 μL | － |
充分混合，在37℃加熱５min。以空白為對(duì)照，測(cè)定樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度。 主波長(zhǎng)600 nm／副波長(zhǎng)700 nm | |||
◆加標(biāo)回收測(cè)試
膽固醇的加標(biāo)回收測(cè)試，將已知含量的標(biāo)準(zhǔn)品加標(biāo)到人、小鼠、大鼠樣品中，n=2。
人樣品
人樣品 | 添加量（mg/dL） | 測(cè)定值（mg/dL） | 回收量（mg/dL） | 回收率（%） |
血清樣品 | 0 | 166.4 | ||
47.6 | 219.1 | 52.6 | 110.60% | |
99.7 | 276.2 | 109.7 | 110.00% | |
150.4 | 326.3 | 159.9 | 106.30% | |
201.3 | 378.3 | 211.9 | 105.20% | |
血漿樣品（EDTA） | 0 | 130.2 | ||
47.6 | 181 | 50.8 | 106.60% | |
99.7 | 237.8 | 107.6 | 107.90% | |
150.4 | 280.5 | 150.3 | 100.00% | |
201.3 | 343.2 | 213 | 105.80% |
小鼠樣品
小鼠樣品 | 添加量（mg/dL） | 測(cè)定值（mg/dL） | 回收量（mg/dL） | 回收率（%） |
血清樣品 | 0 | 86.1 | ||
47.6 | 136.1 | 50 | 105.00% | |
99.7 | 188.6 | 102.5 | 102.80% | |
150.4 | 239.3 | 153.2 | 101.90% | |
201.3 | 288.1 | 202 | 100.30% | |
血漿樣品（EDTA） | 0 | 35.5 | ||
47.6 | 84.5 | 49.1 | 103.10% | |
99.7 | 134.4 | 98.9 | 99.20% | |
150.4 | 188.9 | 153.5 | 102.10% | |
201.3 | 230.6 | 195.1 | 96.90% |
大鼠樣品
大鼠樣品 | 添加量（mg/dL） | 測(cè)定值（mg/dL） | 回收量（mg/dL） | 回收率（%） |
血清樣品 | 0 | 69.9 | ||
47.6 | 121.5 | 51.6 | 108.30% | |
99.7 | 161.8 | 91.9 | 92.10% | |
150.4 | 220.8 | 150.8 | 100.30% | |
201.3 | 276.8 | 206.9 | 102.70% | |
血漿樣品（EDTA） | 0 | 42.6 | ||
47.6 | 91.8 | 49.2 | 103.30% | |
99.7 | 137.6 | 95 | 95.30% | |
150.4 | 180.1 | 137.5 | 91.50% | |
201.3 | 235.8 | 193.2 | 96.00% |
◆樣品檢測(cè)示例
人血清樣品
樣品批次 | 測(cè)定值（mg/dL） | 平均值（mg/dL） | SD | CV（%） | |
人血清 | 191.7 | 173.6 | 182.7 | 12.8 | 7 |
人血漿（EDTA） | 143.2 | 143.1 | 143.2 | 0.02 | 0 |
混合人血清，男性 | |||
序號(hào) | 平均值 | SD | CV（%） |
1 | 0.687 | 0.001 | 0.2 |
混合人K2EDTA血漿，男性 | |||
序號(hào) | 平均值 | SD | CV（%） |
1 | ※0.352 | 0.003 | 0.8 |
大鼠血清（10%稀釋）
序號(hào) | 測(cè)定值（mg/dL） | 平均值（mg/dL） | SD | CV（%） | |
1 | 60 | 67.1 | 63.6 | 5.03 | 7.9 |
2 | 84.6 | 89 | 86.8 | 3.12 | 3.6 |
3 | 90.7 | 80.8 | 85.8 | 7 | 8.2 |
4 | 82.1 | 72.3 | 77.2 | 6.88 | 8.9 |
5 | 89.3 | 93.9 | 91.6 | 3.24 | 3.5 |
大鼠血漿（EDTA）
序號(hào) | 測(cè)定值（mg/dL） | 平均值（mg/dL） | SD | CV（%） | |
1 | 42.9 | 38.6 | 40.8 | 3.03 | 7.4 |
2 | 59.3 | 54.3 | 56.8 | 3.56 | 6.3 |
3 | 51.1 | 46.3 | 48.7 | 3.38 | 6.9 |
4 | 45.2 | 40.2 | 42.7 | 3.58 | 8.4 |
5 | 59.2 | 63.7 | 61.5 | 3.15 | 5.1 |
20% 稀釋健康大鼠血清, Sprague Dawley，雄性 | |||
序號(hào) | 平均值 | SD | CV（%） |
1 | ※0.300 | 0 | 0 |
2 | ※0.371 | 0.004 | 1.1 |
3 | ※0.289 | 0.017 | 5.8 |
4 | ※0.365 | 0 | 0.1 |
5 | ※0.382 | 0.029 | 7.6 |
健康大鼠K2EDTA血漿，Sprague Dawley，雄性 | |||
序號(hào) | 平均值 | SD | CV（%） |
1 | ※0.333 | 0.004 | 1.2 |
2 | ※0.356 | 0.003 | 0.8 |
3 | ※0.325 | 0.02 | 6 |
4 | ※0.218 | 0.005 | 2.6 |
5 | 0.515 | 0.01 | 1.9 |
小鼠血清（20%稀釋）
序號(hào) | 測(cè)定值（mg/dL） | 平均值（mg/dL） | SD | CV（%） | |
1 | 95.4 | 89.3 | 92.4 | 4.31 | 4.7 |
2 | 85.3 | 84.5 | 84.9 | 0.58 | 0.7 |
3 | 68.6 | 71 | 69.8 | 1.71 | 2.5 |
4 | 80.9 | 73.6 | 77.3 | 5.22 | 6.8 |
5 | 64.8 | 66.8 | 65.8 | 1.45 | 2.2 |
小鼠血漿（EDTA）
序號(hào) | 測(cè)定值（mg/dL） | 平均值（mg/dL） | SD | CV（%） | |
1 | 41.2 | 39.1 | 40.1 | 1.51 | 3.8 |
2 | 43.7 | 40.8 | 42.2 | 2.01 | 4.8 |
3 | 35.8 | 38.7 | 37.2 | 2.08 | 5.6 |
4 | 43.1 | 41.4 | 42.2 | 1.23 | 2.9 |
5 | 39.3 | 40.7 | 40 | 0.99 | 2.5 |
| 20% 稀釋健康小鼠血清，CD-1（ICR），雄性 | |||
序號(hào) | 平均值（mEq/L） | SD | CV（%） |
1 | 1.118 | 0.001 | 0.1 |
2 | 0.788 | 0.007 | 0.9 |
3 | 0.715 | 0.022 | 3.1 |
4 | 0.794 | 0.002 | 0.2 |
5 | 0.829 | 0.005 | 0.6 |
健康小鼠血漿K2EDTA, CD-1（ICR），雄性 | |||
序號(hào) | 平均值 | SD | CV(%) |
1 | ※0.309 | 0.002 | 0.6 |
2 | ※0.320 | 0.002 | 0.6 |
3 | ※0.205 | 0.004 | 2 |
4 | ※0.179 | 0.008 | 4.6 |
5 | ※0.305 | 0.017 | 5.6 |
健康比格犬EDTA血漿，雄性 | ||||
序號(hào) | 平均值（mEq/L） | SD | CV(%) | 年齡 |
1 | 0.442 | 0.0033 | 0.7 | 4 |
2 | 0.427 | 0.011 | 2.6 | 6 |
3 | ※0.308 | 0.0037 | 1.2 | 10 |
4 | 0.478 | 0.0123 | 2.6 | 12 |
5 | 0.473 | 0.005 | 1 | 6 |
6 | ※0.367 | 0.0047 | 1.2 | 11 |
7 | 0.78 | 0.0133 | 1.7 | 10 |
8 | 0.411 | 0.0387 | 9.4 | 12 |
健康比格犬血清，雄性 | ||||
序號(hào) | 平均值（mEq/L） | SD | CV（%） | 年齡 |
1 | 0.656 | 0.0027 | 0.4 | 4 |
2 | 0.665 | 0.032 | 4.8 | 6 |
3 | 0.425 | 0.009 | 2 | 6 |
4 | ※0.38 | 0.0057 | 1.5 | 11 |
5 | 0.882 | 0.007 | 0.8 | 12 |
6 | 0.599 | 0.006 | 1.1 | 6 |
7 | 1.006 | 0.0267 | 2.7 | 10 |
8 | 0.506 | 0.006 | 1.2 | 4 |
健康短毛貓EDTA血漿，雄性 | ||||
序號(hào) | 平均值（mEq/L） | SD | CV（%） | 年齡 |
1 | 1.099 | 0.0103 | 0.9 | 0.5 |
2 | ※0.174 | 0.0033 | 2 | 1 |
3 | ※0.241 | 0.0043 | 1.7 | 3 |
4 | ※0.320 | 0.0067 | 2.2 | 0.5 |
5 | ※0.359 | 0.006 | 1.7 | 3 |
6 | ※0.197 | 0.012 | 6.2 | 3 |
7 | ※0.215 | 0.024 | 11.1 | 0.5 |
8 | ※0.131 | 0.016 | 12.3 | 1 |
健康短毛貓血清，雄性 | ||||
序號(hào) | 平均值(mEq/L) | SD | CV(%) | 年齡 |
1 | 0.717 | 0.0117 | 1.6 | 3 |
2 | 0.635 | 0.01 | 1.6 | 3 |
3 | 1.004 | 0.0053 | 0.5 | 6 |
4 | 0.981 | 0.0093 | 0.9 | 4 |
5 | 0.636 | 0.017 | 2.7 | 6 |
6 | 1.193 | 0.0267 | 2.3 | 6 |
7 | 1.022 | 0.0893 | 8.8 | 1 |
8 | ※0.382 | 0.0157 | 4.1 | 1 |
◆稀釋線性度測(cè)試
點(diǎn)擊 http://labchem.fujifilm-wako.com.cn/product/show/1054.html，了解LabAssay™系列試劑盒。
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 |
| 635-50981 | LabAssay™ Cholestrol LabAssay™ 膽固醇檢測(cè)試劑盒 | 500 tests |
※ 產(chǎn)品已更新，舊編號(hào)為：294-65801
◆參考文獻(xiàn)
1. | Kobayashi, Y. et al. : J. Pharmacogn. Nat. Prod., online (2015). Effects of Morus alba L. (Mulberry) Leaf Extract in Hypercholesterolemic Mice on Suppression of Cholesterol Synthesis ※小鼠肝臟提取物 |
2. | Gao, F. et al. : Evid. Based Complement. Alternat. Med., 2015, 801291(2015). Effect of Keishibukuryogan on Genetic and Dietary Obesity Models ※大鼠肝組織提取物 |
3. | Yoshioka, H. and Onosaka, S. : Fundam. Toxicol. Sci., 3, 151(2016). Zinc sulfate pretreatment prevents carbon tetrachloride-induced lethal toxicity through metallothionein-mediated suppression of lipid peroxidation in mice ※小鼠血漿 |
4. | Fujii, N. et al. : Aging Cell, 16, 508 (2017). Sterol regulatory element-binding protein-1c orchestrates metabolic remodeling of white adipose tissue by caloric restriction※大鼠血漿 |
5. | Ushio, M. et al. : Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab., 305, E293 (2013). Ezetimibe prevents hepatic steatosis induced by a high-fat but not a high-fructose diet ※小鼠組織提取物 |
6. | Kobayashi, Y. et al. : Biosci. Biotechnol. Biochem., 74, 2385 (2010). Ameliorative Effects of Mulberry (Morus alba L.) Leaves on Hyperlipidemia in Rats Fed a High-Fat Diet: Induction of Fatty Acid Oxidation, Inhibition of Lipogenesis, and Suppression of Oxidative Stress ※大鼠組織提取物 |
LabAssay™ 膽固醇檢測(cè)試劑盒