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無需預(yù)孵育！導(dǎo)入細(xì)胞質(zhì)的蛋白轉(zhuǎn)染試劑             

ProteoCarry ＜Protein Transfection Reagent＞

本產(chǎn)品是將蛋白以及葡聚糖等生物大分子導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)，尤其是導(dǎo)入細(xì)胞質(zhì)的試劑。傳統(tǒng)的蛋白轉(zhuǎn)染試劑存在蛋白滯留在內(nèi)體或溶酶體中的問題，但是由于本產(chǎn)品可以高效地將蛋白運(yùn)送至細(xì)胞質(zhì)，可以廣泛地適用于在評價(jià)導(dǎo)入蛋白的細(xì)胞內(nèi)功能和抗體導(dǎo)入引起的功能抑制誘導(dǎo)等的實(shí)驗(yàn)。另外與傳統(tǒng)產(chǎn)品不同的是，本品無需與蛋白進(jìn)行預(yù)孵育，所以不會形成復(fù)合體，低限度地限制其對蛋白功能的影響。

※本產(chǎn)品僅供研究，研究以外請勿使用。

◆蛋白轉(zhuǎn)染試劑及其問題

蛋白轉(zhuǎn)染試劑（Proteofection試劑）是將重組蛋白和抗體直接導(dǎo)入細(xì)胞的工具。與將質(zhì)粒導(dǎo)入以誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白的方法相比，可以更迅速地導(dǎo)入目的蛋白，因而受到了廣泛地關(guān)注。

雖然已經(jīng)開發(fā)了許多基于肽、陽離子的脂質(zhì)或聚合物的蛋白轉(zhuǎn)染試劑，但它們都是與蛋白形成復(fù)合物后，通過胞吞作用攝入細(xì)胞內(nèi)，破壞內(nèi)體膜將其運(yùn)送至細(xì)胞質(zhì)。然而，現(xiàn)有的大部分試劑內(nèi)體膜的破壞活性低，并且從內(nèi)體逃脫不足，導(dǎo)入的蛋白大部分都轉(zhuǎn)移至溶酶體降解系統(tǒng)。本產(chǎn)品是一種新型肽蛋白轉(zhuǎn)染試劑，克服了傳統(tǒng)的蛋白轉(zhuǎn)染試劑的缺點(diǎn)，通過強(qiáng)有力的內(nèi)體膜選擇性破壞活性，高效地向細(xì)胞質(zhì)運(yùn)送蛋白，使轉(zhuǎn)導(dǎo)的蛋白在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮活性。另外，與傳統(tǒng)的蛋白轉(zhuǎn)染試劑不同，本品無需與蛋白的復(fù)合物，不僅僅是蛋白，還可以向細(xì)胞質(zhì)導(dǎo)入生物大分子（葡聚糖等）。

圖1.　細(xì)胞導(dǎo)入原理的比較

圖2是導(dǎo)入熒光標(biāo)記IgG的案例。不添加轉(zhuǎn)染試劑時，以內(nèi)體/溶酶體的染色為主，從細(xì)胞質(zhì)中無法獲得熒光信號，與之相對的，可以觀察到在本產(chǎn)品案例中，內(nèi)體、細(xì)胞質(zhì)被大面積染色。（詳情請參照應(yīng)用實(shí)例）

圖2.　向HeLa細(xì)胞導(dǎo)入熒光標(biāo)記IgG的比較

◆特點(diǎn)

●　基于肽特性的蛋白轉(zhuǎn)染試劑，顯示出高度水溶性。

●　優(yōu)異的內(nèi)體膜破壞活性，與傳統(tǒng)方法相比顯示出高細(xì)胞質(zhì)傳達(dá)性。

●　無需與導(dǎo)入物質(zhì)進(jìn)行預(yù)孵育，可以簡便且迅速地轉(zhuǎn)染。

●　由于不會與蛋白形成復(fù)合物，所以需要添加濃度較高的蛋白，但是可以低限度地抑制對蛋白功能的影響。

●　只需要1小時的處理就可以充分地轉(zhuǎn)染至細(xì)胞質(zhì)。

●　有無血清（<10% FBS）不會影響導(dǎo)入效率，可以根據(jù)想要使用的細(xì)胞設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。

●　已有向細(xì)胞質(zhì)導(dǎo)入各種蛋白及生物大分子的應(yīng)用實(shí)例。

●　例：IgG抗體、功能性蛋白（Cre recombinase, Saponin）、多糖（葡聚糖）

●　推薦使用濃度幾乎沒有細(xì)胞毒性。

◆使用方法概述

1.　向新鮮的培養(yǎng)基（無血清培養(yǎng)基，10%以下含F(xiàn)BS培養(yǎng)基或PBS）添加本產(chǎn)品以及想要導(dǎo)入的蛋白。

1.　（配制轉(zhuǎn)染混合液）。

1.　※無需預(yù)孵育

2.　用PBS清洗2次細(xì)胞（80%以下的融合狀態(tài)）后，向細(xì)胞添加轉(zhuǎn)染混合液。

3.　在轉(zhuǎn)染混合液中培養(yǎng)細(xì)胞（~1h）

4.　用PBS清洗2次細(xì)胞后，添加新鮮的培養(yǎng)基。

5.　實(shí)現(xiàn)各項(xiàng)應(yīng)用。

◆試劑盒組成

●　ProteoCarry（4 mg）

●　FITC-dextran（2 mg，陽性對照用）

實(shí)驗(yàn)次數(shù)的預(yù)測

◆有導(dǎo)入數(shù)據(jù)的細(xì)胞

HeLa, SW280, COS7, NIH3T3, HUVEC

參考導(dǎo)入量

※導(dǎo)入效率根據(jù)細(xì)胞類型，細(xì)胞數(shù)量和蛋白類型各種因素改變。以上數(shù)據(jù)僅供參考，建議每次實(shí)驗(yàn)都要優(yōu)化數(shù)據(jù)。

◆應(yīng)用實(shí)例

1.　向細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入FITC-dextran

向HeLa細(xì)胞導(dǎo)入FITC-Dextran（培養(yǎng)基的終濃度為200 μg/mL），僅向細(xì)胞添加FITC-Dextran時，（Reagent(-)）觀察到點(diǎn)狀的熒光信號，細(xì)胞質(zhì)中幾乎沒有觀察到信號；相反，使用本產(chǎn)品時擴(kuò)散到了整個細(xì)胞質(zhì)。

實(shí)驗(yàn)概要：

向HeLa細(xì)胞（80% confluent）添加200 μg/mL FITC-dextran, 1×ProteoCarry in α-MEM，并培養(yǎng)1個小時。用PBS清洗細(xì)胞后，進(jìn)行核染色（Hoechst）。

2.　向細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入熒光標(biāo)記IgG

向HeLa細(xì)胞導(dǎo)入熒光標(biāo)記IgG抗體（培養(yǎng)基終濃度為250 μg/mL），僅有抗體添加至細(xì)胞時，可以觀察到胞吞作用自發(fā)性攝入點(diǎn)狀的熒光信號，表明抗體停留在內(nèi)體和溶酶體中。另一方面，使用本產(chǎn)品時，不僅能觀察到點(diǎn)狀的內(nèi)體結(jié)構(gòu)，還可以觀察到它主要在細(xì)胞質(zhì)中廣泛擴(kuò)散。

※用熒光信號觀察細(xì)胞擴(kuò)散時，與內(nèi)體相比，由于細(xì)胞質(zhì)的體積較大，信號會被稀釋。細(xì)胞質(zhì)信號的檢測需要添加高濃度的熒光標(biāo)記蛋白，在本數(shù)據(jù)中添加了250 μg/mL的熒光標(biāo)記IgG。

實(shí)驗(yàn)概要：

向HeLa細(xì)胞（80% confluent）添加250 μg/mL熒光標(biāo)記IgG，1×ProteoCarry in α-MEM并培養(yǎng)1小時。用PBS清洗細(xì)胞后，進(jìn)行核染色（Hoechst）。

3.　向細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入Cre recombinase

將設(shè)計(jì)為Cre recombinase不存在時表達(dá)DsRed，只有在Cre recombinase存在時發(fā)生重組表達(dá)GFP的質(zhì)粒向HeLa細(xì)胞導(dǎo)入基因。相對于導(dǎo)入第二天就表達(dá)DsRed的HeLa細(xì)胞，使用本產(chǎn)品導(dǎo)入Cre recombinase（培養(yǎng)基終濃度為10 μM），依賴導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的Cre recombinase表達(dá)GFP，本產(chǎn)品在維持Cre recombinase的功能下將其導(dǎo)入了細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)概要：

向HeLa細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的第二天，向HeLa細(xì)胞添加10 μM Cre recombinase, 1×ProteoCarry in α-MEM，并培養(yǎng)1小時。用PBS清洗細(xì)胞后，用新的培養(yǎng)基再培養(yǎng)24小時。

◆保存

●　運(yùn)輸：室溫

●　保存：-20℃

◆產(chǎn)品列表