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LumiMAT™是基于MAT法（單核細(xì)胞活化反應(yīng)測(cè)定法，Monocyte Activation Test）開(kāi)發(fā)的熱原（Pyrogen）檢測(cè)試劑盒。
家兔熱原試驗(yàn)是早期廣泛用于熱原檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)方法，該方法通過(guò)向兔靜脈中注射待測(cè)樣品并觀察其體溫變化來(lái)判斷是否存在熱原。但家兔熱原試驗(yàn)在再現(xiàn)性、精確度、成本等方面存在問(wèn)題，因此鱟試劑作為替代法被廣泛使用。

LumiMAT™ 熱原檢測(cè)試劑盒

LumiMAT™是基于MAT法（單核細(xì)胞活化反應(yīng)測(cè)定法，Monocyte Activation Test）開(kāi)發(fā)的熱原（Pyrogen）檢測(cè)試劑盒。

熱原是導(dǎo)致動(dòng)物體溫升高的物質(zhì)的總稱，非口服藥和與直接接觸血液的醫(yī)療器械不可被熱原污染。家兔熱原試驗(yàn)是早期廣泛用于熱原檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)方法，該方法通過(guò)向兔靜脈中注射待測(cè)樣品并觀察其體溫變化來(lái)判斷是否存在熱原。但家兔熱原試驗(yàn)在再現(xiàn)性、精確度、成本等方面存在問(wèn)題，因此鱟試劑作為替代法被廣泛使用。然而，鱟試劑無(wú)法檢測(cè)出非內(nèi)毒素?zé)嵩?，因此必要時(shí)也會(huì)使用家兔熱原試驗(yàn)。

MAT法是作為家兔熱原試驗(yàn)的替代法而開(kāi)發(fā)的In vitro熱原檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，不僅可檢測(cè)內(nèi)毒素，還能檢測(cè)非內(nèi)毒素?zé)嵩?/span>

◆產(chǎn)品概要

本產(chǎn)品是用于檢測(cè)非口服藥品和醫(yī)療器械中混入或附著的熱原的MAT法試劑，需與LumiMAT Pyrogen Detection Kit - Cells（產(chǎn)品編號(hào)：298-36991）配合使用，不僅可以檢測(cè)內(nèi)毒素，還可檢測(cè)大部分非內(nèi)毒素?zé)嵩?/span>

◆試劑盒組成

● 細(xì)胞用培養(yǎng)基：20 mL

● 稀釋用培養(yǎng)基：100 mL

● 發(fā)光檢測(cè)緩沖液：12 mL

● 發(fā)光底物：240 μL

◆檢測(cè)原理

MAT法是利用人單核細(xì)胞被熱原激活后產(chǎn)生炎癥細(xì)胞因子等物質(zhì)來(lái)檢測(cè)熱原的方法。

傳統(tǒng)的MAT法

使用PBMC（外周血單核細(xì)胞）作為細(xì)胞來(lái)源，通過(guò)ELISA法檢測(cè)單核細(xì)胞中釋放的細(xì)胞因子，從而檢測(cè)樣品中的熱原。

LumiMAT

LumiMAT™使用單核細(xì)胞系NOMO-1，其引入熒光素酶報(bào)告基因，通過(guò)表達(dá)熒光素酶蛋白以響應(yīng)因暴露于熱原而激活的 NF-kB信號(hào)。當(dāng)熱原與Toll-like Receptor（TLR）結(jié)合后，NF-κB信號(hào)會(huì)被激活，從而表達(dá)熒光素酶蛋白。當(dāng)向其加入發(fā)光底物后，會(huì)發(fā)生發(fā)光反應(yīng)，可通過(guò)檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度檢測(cè)熱原。

LumiMAT™的特點(diǎn)

◆檢測(cè)步驟

進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，需要LumiMAT™ Pyrogen Detection Kit – Cells（產(chǎn)品編號(hào)：298-36991）和LumiMAT™ Pyrogen Detection Kit – Reagent Set（產(chǎn)品編號(hào)：297-96801）一同使用。

向96孔板中添加待測(cè)樣品或內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品，添加報(bào)告細(xì)胞后孵育3 h。然后添加發(fā)光底物，使用酶標(biāo)儀檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度。與傳統(tǒng)的ELISA法檢測(cè)相比，LumiMAT™在同一個(gè)平板中進(jìn)行檢測(cè)，可減少實(shí)驗(yàn)差異。此外，傳統(tǒng)方法需要1.5 天，而LumiMAT™僅需5 h左右即可得到檢測(cè)結(jié)果。

標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍

RLU：Relative Light Unit（相對(duì)光強(qiáng)度）

EU：Endotoxin Unit（內(nèi)毒素單位）

使用內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，以Endotoxin Equivalents（EE)/mL計(jì)算熱原含量。

標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍：0.0125～0.8 EE/mL

◆檢測(cè)數(shù)據(jù)

再現(xiàn)性

使用3個(gè)批次的LumiMAT™，檢測(cè)準(zhǔn)確率和精確度（n=4，各批次分別檢測(cè)3次）。添加6個(gè)濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品（USP-RSE），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度（EU/mL）。

已確認(rèn)所有批次的準(zhǔn)確率（檢測(cè)值/標(biāo)準(zhǔn)值）都在±10%以內(nèi)，精確度都在CV20%以下，具有高再現(xiàn)性。

對(duì)非內(nèi)毒素?zé)嵩∟EP，Non-Endotoxin Pyrogen）的反應(yīng)性

向各Toll-like receptor (TLR)中添加不同濃度的非內(nèi)毒素?zé)嵩∟EP），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算每種NEP的濃度（EE/mL）?？v軸：EE/mL，橫軸：添加的NEP濃度

已確認(rèn)不同濃度的NEP均可檢測(cè)。

◆加標(biāo)回收測(cè)試

1.使用市售藥品進(jìn)行加標(biāo)回收測(cè)試

向各種藥品中添加內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品，計(jì)算回收率。

*MVD : 最大有效稀釋倍數(shù)（Maximum Valid Dilution）

**無(wú)干擾的標(biāo)準(zhǔn): 50 < 回收率(%) < 200

在MVD范圍的稀釋倍率內(nèi)，所有藥品的回收率均在50~200%的范圍內(nèi)。

2.使用藥品原料進(jìn)行加標(biāo)回收測(cè)試

適用于各種樣品的檢測(cè)。

LumiMAT™采用NanoLuc®技術(shù)。NanoLuc® 技術(shù)由Promega Corporation授權(quán)。授權(quán)專-利：美國(guó)專-利第8557970號(hào)、美國(guó)專-利第8669103號(hào)以及與美國(guó)專-利第8557970號(hào)、美國(guó)專-利第8669103號(hào)享有同等優(yōu)先權(quán)的所有專-利及申請(qǐng)中的專-利。NanoLuc® 為Promega Corporation的注冊(cè)商標(biāo)。

◆產(chǎn)品列表