什么樣的標(biāo)簽適合用于免疫沉淀呢？

    His標(biāo)簽是由6個(gè)組氨酸(His-His-His-His-His-His)組成的短肽,專門設(shè)計(jì)用于重組蛋白質(zhì)的吸附純化。由于分子量較小，并且較容易分離和純化，His-tag 融合標(biāo)簽與其他標(biāo)簽相比有很多明顯優(yōu)勢, 是目前用于純化的融合標(biāo)簽中使用為廣泛的一種。His抗體也常用于檢測和His標(biāo)簽融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量檢測His融合表達(dá)蛋白等。  

    為什么推薦使用His標(biāo)簽抗體偶聯(lián)的瓊脂糖/磁珠？

    與使用Protein A/G瓊脂糖的傳統(tǒng)免疫沉淀（IP）方法相比，Abbkine的瓊脂糖/磁珠偶聯(lián)標(biāo)簽抗體，省去了Protein A/G與抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合的步驟。偶聯(lián)抗體直接和目標(biāo)蛋白結(jié)合后，通過離心或使用磁力架，將目標(biāo)蛋白從細(xì)胞裂解液中分離出來。不僅讓實(shí)驗(yàn)變得簡單快捷，更可以避免非特異性結(jié)合，降低背景。表位標(biāo)記蛋白的免疫沉淀可用于確定蛋白的細(xì)胞定位、研究翻譯后修飾或檢測標(biāo)記蛋白與其它蛋白之間的相互作用。  

•     看到這里，您肯定會(huì)問，Protein A/G的缺點(diǎn)是什么？

1.     1.耗時(shí)：使用Protein A/G需要額外的孵育與洗滌操作
2.     2.效果差：當(dāng)抗體種屬、亞型和ProteinA/G不匹配時(shí)，ProteinA/G和抗體結(jié)合能力弱
3.     3.背景高：和樣本中的其他免疫球蛋白結(jié)合，產(chǎn)生非特異性結(jié)合，導(dǎo)致高背景。  

    這就是艾美捷科技為您推薦瓊脂糖/磁珠偶聯(lián)His標(biāo)簽抗體的原因：

       瓊脂糖/磁珠偶聯(lián)His標(biāo)簽抗體，優(yōu)勢更加突出：  

•     高特異性—高特異性單克隆標(biāo)簽抗體可實(shí)現(xiàn)高產(chǎn)量和高純度免疫沉淀
•     低背景—穩(wěn)定、預(yù)封閉的填料及特異性抗體減少了免疫沉淀過程中的非特異性結(jié)合
•     規(guī)格靈活：100ul, 400ul, 2ml，多規(guī)格可供選擇。滿足不同規(guī)模的免疫沉淀需求
•     操作方便—產(chǎn)品說明書提供了免疫沉淀優(yōu)化方案，一次免疫沉淀時(shí)間約1 - 2小時(shí)
•     兼容性強(qiáng)—填料可以兼容手動(dòng)及自動(dòng)化操作

        瓊脂糖/磁珠偶聯(lián)His標(biāo)簽抗體使用說明：

•     * 瓊脂糖微球是多孔的，這使得它們具有高的表面積與蛋白質(zhì)相互接觸，并可以容納大量的液體。在純化大量蛋白的時(shí)候，傳統(tǒng)的瓊脂糖微球偶聯(lián)抗體是IP實(shí)驗(yàn)的選擇。（瓊脂糖：每個(gè)樣品加入20ul懸液）
•     * 在IP實(shí)驗(yàn)中，由于所有的相互作用均發(fā)生在磁珠的外表面，并且磁珠的尺寸更均一，所以磁珠的可重復(fù)性和純度通常高于瓊脂糖。磁性分離不需要離心和多次洗滌，且孵育時(shí)間短，在日常小規(guī)模、快速處理多個(gè)樣品的IP實(shí)驗(yàn)時(shí)，磁珠偶聯(lián)抗體更簡單、更快速。（磁珠：每個(gè)樣品加入10-20ul懸液）
•     * 提供形式：液體（抗體-瓊脂糖/磁珠復(fù)合物：保護(hù)液=1:1，50%的懸浮液）
•     *  儲(chǔ)存方式：4°C可保存一年，瓊脂糖偶聯(lián)標(biāo)簽抗體避免凍融和渦旋；磁珠偶聯(lián)標(biāo)簽抗體避免凍融和離心