天狼星紅和快綠是一種用于區(qū)分膠原蛋白與其周圍物質(zhì)的染料組合。天狼星紅專門綁定[Gly-X-Y]原纖維膠原的螺旋結(jié)構(gòu)，無(wú)論膠原類型或種類如何，而Fast Green與非膠原結(jié)合蛋白質(zhì)。通過(guò)利用這兩種染料的d特特征，Chondrex 提供了一種簡(jiǎn)單的半定量測(cè)定試劑盒來(lái)測(cè)定培養(yǎng)細(xì)胞層和組織切片中膠原蛋白和非膠原蛋白的量（1-2）。因?yàn)樵摐y(cè)定不需要膠原蛋白增溶，可用于測(cè)量各種組織中的總膠原蛋白含量（3-7）。由于天狼星紅和快綠分別在540 nm和605 nm處有吸收，因此提取的染料的OD值可用于計(jì)算樣品的膠原蛋白和非膠原蛋白含量。用于組織切片為10-20的一般組織學(xué)研究μm厚，膠原蛋白和非膠原蛋白的檢測(cè)靈敏度分別大于3μg/切片和50μg/切片。這個(gè)試劑盒中的試劑足以對(duì)30-50個(gè)樣本進(jìn)行染色。

艾美捷天狼猩紅膠原蛋白染色試劑盒：

貨號(hào)：9046

描述：總膠原蛋白定量染色試劑盒

格式： 玻璃載玻片和細(xì)胞培養(yǎng)板

檢測(cè)類型： 染料染色

檢測(cè)時(shí)間： 根據(jù)樣本類型不同而有所變化

標(biāo)準(zhǔn)范圍： 膠原蛋白：每個(gè)切片3微克

非膠原蛋白質(zhì)：每個(gè)切片50微克

樣本數(shù)量： 每個(gè)試劑盒可處理30-50個(gè)樣本

樣本類型： 培養(yǎng)細(xì)胞和組織切片

推薦樣本稀釋倍數(shù)： 不適用

顯色劑： 不適用（在540和605納米處讀?。?/span>

存儲(chǔ)： 室溫下可保存12個(gè)月

天狼猩紅膠原蛋白染色試劑盒試劑盒內(nèi)容：

項(xiàng)目 數(shù)量 金額 存儲(chǔ)條件

染料溶液（90461） 1瓶 10毫升 室溫

染料提取緩沖液（90462） 2瓶 30毫升 室溫

計(jì)算結(jié)果：

要計(jì)算膠原蛋白的量，需要通過(guò)減去Fast Green在540 nm的貢獻(xiàn)來(lái)校正OD 540值，Fast Green在OD 605值中占29.1%。在OD 540和605下，膠原蛋白的顏色等效（OD值/μg蛋白）為0.0378，非膠原蛋白的為0.00204。

膠原蛋白（μg/節(jié)）=【OD 540 value – (OD 605 value x 0.291)】/0.0378

非膠原蛋白（μg/節(jié)）=OD 605 value/0.00204

注意事項(xiàng)1：較厚的切片在洗滌步驟中容易從載玻片上脫落，請(qǐng)仔細(xì)洗滌載玻片。此外，由于檢測(cè)靈敏度與載玻片上組織的表面積有關(guān)，切割較薄的切片不會(huì)顯著提高檢測(cè)靈敏度。

注意事項(xiàng)2：非膠原蛋白值可用于標(biāo)準(zhǔn)化樣本結(jié)果，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)水平與樣本的表面積或細(xì)胞密度相關(guān)。

天狼猩紅膠原蛋白染色試劑盒文獻(xiàn)參考：

1. M. Marotta, G. Martino, Sensitive Spectrophotometric Method for the Quantitative Estimation of Collagen. Anal Biochem 150, 86-90 (1985).

2. L. López-De Leon, M. Rojkind, A Simple Micromethod for Collagen and Total Protein Determination in Formalin-Fixed ParaffinEmbedded Sections. J Histochem Cytochem 33, 737-43 (1985).

3. W. Jimenez, A. Parés, J. Caballería, D. Heredia, M. Bruguera, et al., Measurement of Fibrosis in Needle Liver Biopsies: Evaluation of a Colorimetric Method. Hepatology 5, 815-8 (Sep-).

4. B. Yue, J. Sugar, K. Schrode, Collagen Staining in Corneal Tissues. Curr Eye Res 5, 559-64 (1986).

5. P. Bedossa, G. Lemaigre, J. Bacci, E. Martin, Quantitative Estimation of the Collagen Content in Normal and Pathologic Pancreas Tissue. Digestion 44, 7-13 (1989).

6. J. James, K. Bosch, D. Aronson, J. Houtkooper, Sirius Red Histophotometry and Spectrophotometry of Sections in the Assessment of the Collagen Content of Liver Tissue and Its Application in Growing Rat Liver. Liver 10, 1-5 (1990).

7. J. Armendáriz-Borunda, M. Rojkind, A Simple Quantitative Method for Collagen Typing in Tissue Samples: Its Application to Human Liver With Schistosomiasis. Coll Relat Res 4, 35-47 (1984).

8. H. E. Thu, I. N. Mohamed, Z. Hussain, N. Mohamed, A. N. Shuid, Eurycoma Longifolia, a Malaysian Medicinal Herb, Significantly Upregulates Proliferation and Differentiation in Pre-Osteoblasts. Int. J. Pharm. Pharm. Sci. 8 (2016).

9. J. Hyllested, K. Veje, K. Ostergaard, Histochemical studies of the extracellular matrix of human articular cartilage--a review.Osteoarthritis Cartilage 10, 333-43 (2002).