Sirius紅是一種d特的染料，能特異性結(jié)合到纖維狀膠原蛋白（I型至V型）的Gly-X-Y 螺旋結(jié)構(gòu)上，并且不會區(qū)分膠原蛋白的種類和類型。Chondrex, Inc.提供Sirius紅總膠原蛋白檢測試劑盒，用于檢測各種含膠原蛋白樣本中的總膠原蛋白含量，如組織標(biāo)本、細(xì)胞培養(yǎng)基和培養(yǎng)細(xì)胞?？倷z測時間不到30分鐘，可以對40個樣本進(jìn)行重復(fù)測量。由于細(xì)胞培養(yǎng)基中膠原蛋白含量較低，可能需要額外的濃縮步驟。為了測定來自不同物種或不同類型樣本的膠原蛋白水平，Chondrex, Inc.推薦使用我們的I型膠原蛋白檢測ELISA試劑盒和II型膠原蛋白檢測ELISA試劑盒。為方便起見，Collagen Detection ELISA試劑盒和Sirius紅總膠原蛋白檢測試劑盒可以使用相同的樣本制備。

艾美捷天狼星紅總膠原檢測試劑盒：

貨號：9062

描述：用于定量樣本中總膠原蛋白含量的檢測試劑盒

格式：帶可拆卸條的96孔ELISA板

檢測類型：比色法檢測

檢測時間：30分鐘

標(biāo)準(zhǔn)范圍：500 µg/ml至8 µg/ml

樣本數(shù)量：每板可處理最多40個（重復(fù)）樣本

樣本類型：組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)基和培養(yǎng)細(xì)胞

推薦樣本稀釋：根據(jù)樣本類型而異

色素：不適用（在510-550 nm下讀取）

儲存條件：-20°C保存12個月

天狼猩紅膠原蛋白染色試劑盒試劑盒內(nèi)容：

項目 數(shù)量 金額 存儲條件

標(biāo)準(zhǔn) - 牛源I型膠原蛋白（90621） 1小瓶 0.5毫克/毫升，1毫升 -20°C

Sirius Red溶液（90622） 1瓶 50毫升 -20°C

洗滌溶液（90623） 1瓶 50毫升 -20°C/*

提取溶液（90624） 1瓶 30毫升 -20°C/*

0.5M醋酸（10倍醋酸）（90625） 1瓶 20毫升 -20°C/*

96孔板（9026） 1個 8孔條 x 12 -20°C/*

*洗滌液、提取液、0.5M醋酸和板也可以在室溫下儲存。不包括用于細(xì)胞培養(yǎng)基樣品的濃縮溶液（目錄號90626）。

培養(yǎng)基：

含有較高濃度血清的樣本可能會導(dǎo)致高背景值。因此，Chondrex公司建議將細(xì)胞培養(yǎng)基中的血清補(bǔ)充濃度降低至5%，使用PBS稀釋。

樣本濃縮：

培養(yǎng)基中膠原蛋白的濃度通常較低，因此在該試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)檢測培養(yǎng)基樣本中的膠原蛋白是困難的。Chondrex公司推薦使用我們的濃縮溶液（產(chǎn)品編號90626）進(jìn)行樣本濃縮。此外，應(yīng)使用培養(yǎng)基作為陰性對照，因為這種濃縮方法可能會導(dǎo)致背景水平升高。

1. 取1毫升培養(yǎng)基。

2. 添加250微升濃縮溶液。

3. 震蕩混勻，并在4°C下孵育16-24小時。

4. 以10,000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心3分鐘。

5. 丟棄上清液。

6. 添加100微升0.05M醋酸溶液以溶解沉淀。將此溶液作為樣本使用。

7. 計算的膠原蛋白濃度應(yīng)乘以0.1的稀釋因子。

化驗大綱：

天狼星紅總膠原檢測試劑盒文獻(xiàn)參考：

Chothani S et al., Widespread Translational Control of Fibrosis in the Human Heart by RNA-Binding Proteins. Circulation 140(11):937-951, (2019). PMID: 31284728

Widjaja AA et al., IL-11 neutralising therapies target hepatic stellate cell-induced liver inflammation and fibrosis in NASH. Gastroenterology 157 (3), 777–792.e714, (2019). PMID: 31078624

Schafer S et al., IL-11 is a crucial determinant of cardiovascular fibrosis. Nature 552, 110-115, (2017). PMID: 29160304

Schanaider A et al., Exogenous pulmonary surfactant prevents the development of intra-abdominal adhesions in rats. J Cell Mol Med 20, 632-43 (2016).