Hypoxyprobe?-1 RED PE試劑盒組件詳細描述

1) Hypoxyprobe?-1是一種取代的2-硝基咪唑，其化學名稱為鹽酸皮莫尼達唑，分子量為290.8；水溶性為400毫摩爾（116 mg/ml）；在324 nm波長下具有紫外線吸收（在0.9%生理鹽水中消光系數為7020）。游離堿基皮莫尼達唑的分子量為254.3，pKa為8.7，八醇-水分配系數為8.5。有關Hypoxyprobe?-1的作用機制。固體Hypoxyprobe?-1在室溫下低光照條件下儲存了兩年，并在4℃的0.9%生理鹽水（100 g/liter）中儲存了4.5年，未檢測到降解（UV和HPLC分析）。皮莫尼達唑在缺氧細胞中被還原激活，并與蛋白質、肽和氨基酸中的巰基（硫氫基）形成穩(wěn)定的加合物。RED PE染料-MAb1與這些加合物結合，從而允許通過免疫化學方法進行檢測。

2) RED PE染料-MAb1是一種與大鼠IgG1單克隆抗體（MAb克隆4.3.11.3）偶聯(lián)的染料，濃度為0.5 mg/ml，含有1% BSA和0.09%疊氮鈉作為穩(wěn)定劑。感興趣的組織可以通過在冷凍固定切片或甲醛固定石蠟包埋切片上的免疫組化進行研究，或者通過組織解離后的流式細胞術進行研究。  

注意：RED PE染料-MAb1結合皮莫尼達唑的蛋白質、肽和氨基酸加合物，但在免疫組化過程中，組織處理會洗去肽和氨基酸加合物，因此免疫組化缺氧檢測依賴于缺氧組織中皮莫尼達唑的蛋白質加合物。

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應用

用于細胞和組織缺氧的免疫化學檢測，包括免疫熒光、免疫過氧化酶或流式細胞術。該Hypoxyprobe?-1 RED PE試劑盒在福爾馬林固定的石蠟包埋大鼠腫瘤組織中提供強烈的免疫染色效果，背景極低。

數量

a. Hypoxyprobe?-1 RED PE試劑盒包含100 mg、200 mg或1000 mg的Hypoxyprobe?-1（匹莫噻唑鹽酸鹽）。通常，動物研究中使用的劑量為60 mg/kg體重。

b. 一個小瓶（100 mg和200 mg試劑盒）或兩個小瓶（1000 mg試劑盒）含有200 ?L稀釋的RED PE染料偶聯(lián)的IgG1大鼠單克隆抗匹莫噻唑抗體（克隆11.23.22.R）。每個小瓶包含200微升的0.50 mg/ml RED PE染料-MAb1溶液，PBS中含有1% BSA和0.09%疊D化鈉。RED PE染料-MAb1的最佳稀釋度由研究人員確定，但發(fā)現(xiàn)1:50-100的稀釋度在大鼠腫瘤組織中提供強烈的免疫熒光染色。RED PE染料-MAb1專為免疫熒光設計，可在熒光顯微鏡下或流式細胞術和Western Blot應用中可視化。免疫熒光中抗體的稀釋度通常低于免疫過氧化酶檢測系統(tǒng)中使用的稀釋度。

不提供

用于免疫組織化學分析的標準試劑。

儲存

a. 將Hypoxyprobe?-1固體在黑暗中室溫儲存（也可在2-8°C的黑暗中儲存）。

b. 將RED PE染料-MAb在2-8°C的黑暗中儲存。請勿冷凍。

檢測說明

1. 正?；蚰[瘤組織缺氧的研究開始于以60 mg/kg體重劑量靜脈輸注、腹腔注射或口服給藥Hypoxyprobe?-1（鹽酸皮莫尼達唑）溶液。對于25克的小鼠，相當于1.5 mg/只。對小鼠使用高達400 mg/kg的劑量未檢測到毒性或組織缺氧變化，但60 mg/kg可以在低成本下獲得良好的免疫染色。Hypoxyprobe?-1在生理鹽水中的溶解度為116 mg/ml，因此可以使用非常小的體積來給藥。注射或口服后，Hypoxyprobe?-1會分布到所有組織，包括大腦，但只有在氧氣濃度低于14微摩爾（相當于37℃下pO2 = 10 mmHg）的細胞中與含巰基的蛋白質形成加合物。除了腫瘤，肝臟、腎臟和皮膚等正常組織中也存在pO2 = 10 mmHg及以下的細胞，這些正常組織也會結合Hypoxyprobe?-1。Hypoxyprobe?-1在小鼠體內的血漿半衰期約為25分鐘。相比之下，老鼠的血漿半衰期為45分鐘，狗為90分鐘，人類為300分鐘。對感興趣的大鼠組織可在Hypoxyprobe?-1給藥后15至90分鐘內收集。在收獲時，組織中殘留的Hypoxyprobe?-1將在組織缺氧時結合，但與組織在15至90分鐘實驗期間暴露的Hypoxyprobe?-1的數量相比，殘留量非常小，因此任何由于殘留Hypoxyprobe?-1導致的非特異性結合是不可檢測的。

除了動物研究，Hypoxyprobe?試劑盒還可以用于細胞培養(yǎng)。通常，細胞懸液在100至200微摩爾的Hypoxyprobe?-1存在下，在缺氧條件下孵育1至2小時。細胞通過細胞旋轉收集，固定并用RED PE MAb-1免疫染色。

Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）專注于研發(fā)非侵略性的缺氧標志物（Hypoxia maker）和缺氧依賴性的細胞因子，所有產品皆基于Pimonidazole核心結構來開發(fā)。 使用Pimonidazole HCl作為缺氧標記物，廣泛用在狗、大小鼠。缺氧探針試劑盒核心組分為：缺氧探針（Pimonidazole 或CCI-103F）和缺氧探針的抗體。不同試劑盒中的探針和抗體標記不同（可應用于免疫熒光（IF），免疫組化（IHC），WB或流式細胞分析（FC））

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