轉(zhuǎn)基因品系玉米176染料法qPCR試劑盒注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系玉米176染料法qPCR試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50次
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
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產(chǎn)品特點(diǎn)：
◇高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增；
◇高靈敏度：檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝；
◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測；
◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
服務(wù)流程：
1、根據(jù)客戶提供的基因序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針（染料法只需設(shè)計(jì)引物）
2、抽提DNA、RNA，并對RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄
3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR
4、提供完整的實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴(kuò)增曲線)
5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽性對照。
土壤細(xì)菌DNA分離　Total HSP-90(Heat Shock Protein 90 total) 　20 ul

土壤細(xì)菌DNA分離+高質(zhì)純化　CASP5(Caspase-5) 　100 ul

冰凍切片DNA分離　Glicentin(Glicentin) 　100 ul

動(dòng)物細(xì)胞基因組DNA分離　RF-IgG(Rheumatoid Factor IgG) 　20 ul

動(dòng)物組織基因組DNA分離　RF-IgA(Rheumatoid Factor IgA) 　100 ul

96孔板細(xì)胞基因組DNA分離　RF-IgM(Rheumatoid Factor IgM) 　100 ul

48孔板細(xì)胞基因組DNA分離　PAX-8(Paired box protein pax-8) 　20 ul

赫特法病DNA純化　CAMP(Cathelicidin Antimicrobial Peptide) 　100 ul

肝病DNA純化　pro-BDNF(pro Brain Derived Neurotrophic Factor) 　100 ul

EB病DNA純化　ITGA1/CD49a(Integrin alpha-1) 　1 g

HSV病DNA純化　NKp44/NCR2(Natural cytotoxicity triggering receptor 2) 　100 ul

HHV病DNA純化　NKp46/NCR1(Natural cytotoxicity triggering receptor 1) 　20 ul

小量真菌/酵母細(xì)胞基因組DNA純化　Cavin 1(Polymerase I and transcript release factor) 　100 ul

革蘭氏陽性細(xì)菌基因組DNA純化　NKp30/NCR3(Natural cytotoxicity triggering receptor 3) 　200 ul

革蘭氏陰性細(xì)菌基因組DNA純化　INT8(IntegRator complex subunit 8) 　100 ul

DNA產(chǎn)物去鐵純化　CAMP(Cathelicidin Antimicrobial Peptide) 　20 ul
轉(zhuǎn)基因品系玉米176染料法qPCR試劑盒Shigla│flexneri提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: B　1b　I　4,6...培養(yǎng)基: CM0051生長條件: 37℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

解脂假絲酵母種屬: Candida lipolytica提供形式: 凍干粉安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 產(chǎn)脂肪酶(原菌株的2-3倍)。由AS2.1203獲得培養(yǎng)基: YM 培養(yǎng)基：酵母提取物，3.0 g 麥芽提取物，3.0 g 葡萄糖，10.0 g 蛋白棟，5.0 g 瓊脂，20.0 g 蒸餾1000 ml ，pH 6.2 +/- 0.2生長條件: 25-28，好氧

Streptomyces│netropsis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 微生物代謝調(diào)控研究培養(yǎng)基: 39生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

普羅菲登斯菌種屬: Providencia│sp.提供形式: 其他安全等級: 3模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 21　23培養(yǎng)基: CM0051生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法

Streptomyces│griseoaurantiacus分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 產(chǎn)生代謝產(chǎn)物具有抑菌活性培養(yǎng)基: 0012生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法；礦物油法；定期移植法

Torulopsis│candida提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 釀造黃酒。培養(yǎng)基: CM0013生長條件: 28-30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法；礦物油法

Micromonospora│sp.分離基物: 灘土提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 抗細(xì)菌；抗枯草芽孢桿菌；抗分枝桿菌607培養(yǎng)基: CM0012生長條件: 35-37C存儲條件: 真空冷凍干燥

大腸桿菌種屬: Escherichia coli提供形式: 凍干粉安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 檢測用菌培養(yǎng)基: 營養(yǎng)肉汁瓊脂： 3g，蛋白胨 10g，NaCl 5g，瓊脂20g，pH 7.2－7.4，蒸餾 1.0L。121℃，15分鐘滅菌。生長條件: 37℃，好氧

Escherichia│coli分離基物: 雛鴨大腸提供形式: 斜面培養(yǎng)物；凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 動(dòng)物疫苗培養(yǎng)基: 33生長條件: 37℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法
注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。