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EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY1002圖片

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更新時(shí)間:2018-05-18 16:00:33瀏覽次數(shù):393

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 詳見說明書
貨號(hào) FS-ATCC-0142 主要用途 科研
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY1002圖片公司專業(yè)代理ATCC以及國家保藏機(jī)構(gòu)提供的細(xì)胞,品系多樣,我司擁有專業(yè)的科研人員長(zhǎng)期進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)和相關(guān)實(shí)驗(yàn),現(xiàn)已掌握各類細(xì)胞生長(zhǎng)特性和生長(zhǎng)條件。具體的說明書和價(jià)格可咨詢我司索取。

詳細(xì)介紹

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY1002圖片本公司專業(yè)代理ATCC細(xì)胞,提供售前售后服務(wù),若要獲取詳細(xì)的說明書或價(jià)格信息,請(qǐng)。
細(xì)胞名稱  EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY1002圖片
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)

特征特性 該細(xì)胞系來源于一無精癥男性的外周血。2010年由中科院昆明細(xì)胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。

培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS

傳代方法 1:

2傳代;5-6天一次  

傳代情況 P3

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS 

支原體檢測(cè) 熒光法(-) 

STR -

同工酶

染色體

使用權(quán)限 A類

操作流程:

※主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡),co2孵箱。
※細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
  ?細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng):從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,同時(shí)不斷搖動(dòng)使之迅速融化,然后用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
  ?細(xì)胞傳代:原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
  ?細(xì)胞形態(tài)的觀察:在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
  ?生長(zhǎng)曲線:取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
  ?細(xì)胞的貼壁率:指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
   ?細(xì)胞的計(jì)數(shù):常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。

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