詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:鵝源性核酸檢測(cè)試劑盒48T0.2PCR管
產(chǎn)品貨號(hào):FS-02R6398
產(chǎn)品規(guī)格:48T 0.2PCR管
產(chǎn)品分類:PCR-熒光探針?lè)?/span>
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解,樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè);樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
HABP ELISA Kit 大鼠透明質(zhì)結(jié)合蛋白Multi-class antibodies: 48T
TOPO II Alpha (Ser1106) 磷化DNA拓普西異構(gòu)Ⅱ抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rhesus antibody Rh GLMN/FK506 binding protein associated protein FK506結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白抗體(他克莫司相關(guān)蛋白) 0.2ml
AMA(Mouse Monocyte antibody) ELISA KIT 小鼠抗單核細(xì)胞抗體 96T
Ninjurin 2 神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2抗體 0.2ml
ASB13 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族13抗體 0.2ml
TOPO II Alpha (Ser1106) 磷化DNA拓普西異構(gòu)Ⅱ抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
SP-C(Human Pulmonary surfatcant-associated protein C) ELISA Kit 人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白CMulti-class antibodies: 48T
HPV18 E6 人類狀瘤病毒18 E6抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh MCG10 RNA相關(guān)結(jié)合蛋白MCG10抗體 0.2ml
ILK-1(Human integrin-linked kinase 1) ELISA Kit 人整合連接激1 96T
RHCG RH血型C糖蛋白抗體 0.2ml
Collagen I Ⅰ型膠原/1型膠原a1抗體 0.1ml
HPV18 E6 人類狀瘤病毒18 E6抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
Rabbit Goat IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗羊IgG 0.3ml
GPR126 G蛋白偶聯(lián)受體126抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ADORA1 腺苷A1A受體抗體 0.2ml
LKB1/FITC 熒光標(biāo)記一種抑癌基因IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit dog IgG 兔抗狗IgG 1mg
Phospho-Syk (Tyr525/526) /FITC 熒光標(biāo)記磷化非受體型酪蛋白激抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
鵝源性核酸檢測(cè)試劑盒48T0.2PCR管紫蘇子Zi Suzi
大腹皮Pericarpium Arecae
使君子(使君子仁)Idolkimi
桃仁(山桃)Peach?(Prunus)
阿米卡星Amikacin
高山紅景天Rhodiola sachalinensis
鹿茸(馬鹿)Pilose antler?(red deer)
豨薟草(豨薟)Herba Siegesbeckiae?(Herba Siegesbeckiae)
桿菌肽Bacitracin
白頭翁Pulsatilla chinensis
牛角粉Water buffalo horn?powder
人參莖葉Ginseng stem leaf
紅霉Erythromycin
環(huán)己烷Cyclohexane
乙醇Ethanol
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。