參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:豬瘟病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒50次
產(chǎn)品貨號(hào):FS-P013600
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品分類:純化試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解,樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè);樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
Human dermato-pontin,DPT ELISA Kit 人皮膚蛋白Multi-class antibodies: 48T
SLC6A19 鉀依賴鈉鈣交換蛋白6Multi-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Goat rat IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 0.1ml
Bid(Human BH3 interacting domain death agonist) ELISA Kit 人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白 96T
NMT2 肉豆蔻?;D(zhuǎn)移2-N端肽抗體 0.2ml
Beclin 1 Bcl-2同源結(jié)構(gòu)域蛋白抗體 0.1ml
SLC6A19 鉀依賴鈉鈣交換蛋白6Multi-class antibodies: 0.2ml
CD14/RBITC 紅色羅丹明標(biāo)記CD14蛋白抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
CRLR/CALCRL(calcitonin receptor like precursor) 降鈣受體樣蛋白抗原Multi-class antibodies: 0.5mg
F-肌動(dòng)蛋白抗體 F-Actin 0.1ml
SLC27A1 長(zhǎng)鏈脂肪轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體 0.2ml
Prickle 刺痛感蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-FGFR1 (Tyr766) 磷化性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1抗體 0.1ml
CRLR/CALCRL(calcitonin receptor like precursor) 降鈣受體樣蛋白抗原Multi-class antibodies: 0.5mg
Mouse human IgG(3D3)/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體 0.1ml
GYG2 糖原蛋白2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ATAD3A/B/C 三磷腺苷家族蛋白3A抗體 0.2ml
PSGD/HOXB13/FITC 熒光標(biāo)記同源盒蛋白HOXB13抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit mouse IgG-Fc/Bio 生物標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-Fc 0.1ml
phospho-c-Jun/AP-1(pThr91/pThr93)/FITC 熒光標(biāo)記抗磷化原癌基因c-Jun抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
豬瘟病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒50次熱帶假絲酵母種屬: Candida│tropicalis提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 13生長(zhǎng)條件: 25-28℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
阿爾萊特葡萄球菌種屬: Staphylococcus│arlettae分離基物: 腐稈劑提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 腐化植物稈培養(yǎng)基: 0002生長(zhǎng)條件: 30℃存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;礦物油法
諾爾斯鏈霉菌種屬: Streptomyces│noursei提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 代謝產(chǎn)物具有弱的抗活性。培養(yǎng)基: 0027生長(zhǎng)條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;礦物油法;定期移植法
變形桿菌種屬: Proteus│sp.提供形式: 凍干物安全等級(jí): 3模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: Kauffmann血清型 9a 1ace培養(yǎng)基: CM0051生長(zhǎng)條件: 37℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
腫瘤壞死因子配體超家族成員9(TNFSF9)ELISA試劑盒液體石蠟 色譜固定液,80℃對(duì) 98%甲基紅鈉鹽(ACS reagent,95 %)
腫瘤壞死因子配體超家族成員7(TNFSF7)ELISA試劑盒液體石蠟 USP級(jí)3-甲 98%間甲基紅
腫瘤壞死因子配體超家族成員4(TNFSF4)ELISA試劑盒液體石蠟 分子生物學(xué)級(jí) 99%紫脲銨(IND)
腫瘤壞死因子配體超家族成員14(TNFSF14)ELISA試劑盒液體石蠟 包埋級(jí)鄰甲 98%紫脲銨(ACS)
腫瘤壞死因子配體超家族成員13(TNFSF13)ELISA試劑盒液體石蠟 輕質(zhì)、密度:0.84-0.86對(duì)甲 98%甲基紫,龍膽紫
腫瘤壞死因子配體超家族成員12(TNFSF12)ELISA試劑盒液體石蠟 重質(zhì)、密度:0.86-0.894- 98%間酚
腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白2(TNFαIP2)ELISA試劑盒硫軟骨A鈉鹽 85%4-甲 97%硝氮黃
腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白72(TAG72)ELISA試劑盒肝鋰 ≥150 USP units/mg4-酚 98%中性紅
腫瘤蛋白p53結(jié)合蛋白1(TP53BP1)ELISA試劑盒肝鋰 ~200 units/mg4-乙 97%橙黃Ⅳ
中性鞘脂(NSMASE)ELISA試劑盒肝鈉 185 USP units/mg 對(duì)甲 98%橙黃Ⅰ
中性粒明膠關(guān)聯(lián)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)ELISA試劑盒透明質(zhì)鈉 95%,來(lái)源:雞冠2,4,6-三 98%鄰二酚紫
中性粒彈性蛋白(ELA2)ELISA試劑盒2-溴乙基乙酯 97%(甲氧基)三基化 98%N-基(釩試劑)
中心體肌動(dòng)蛋白β(CTRN2)ELISA試劑盒2-溴乙 96%4-甲氧基乙炔 99%1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚(AR,≥98%)
中心體蛋白3(CETN3)ELISA試劑盒2-溴乙 分析標(biāo)準(zhǔn)品4-正戊基環(huán)己酮 98%1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚(AR,90.0%)
中心體蛋白2(CETN2)ELISA試劑盒1,4-環(huán)己二酮單乙二縮酮 98%4-正-丁基-4-基聯(lián) 98%藍(lán)VF
中心體蛋白1(CETN1)ELISA試劑盒氧溴化 98%4-正戊氧基乙酰 99%酚酞(IND)