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詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：真核生物18S核酸檢測試劑盒48T0.1PCR管
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-02R6403
產(chǎn)品規(guī)格：48T 0.1PCR管
產(chǎn)品分類：PCR-熒光探針法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
MGr1-Ag/37LRP /FITC 熒光標(biāo)記層粘連蛋白受體1抗體(C端)IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
TNFSF4/CD252/FITC 熒光標(biāo)記壞死因子配體超家族成員4抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh ACCN1/BNaC1/ASIC2 腦鈉通道蛋白1抗體 0.2ml
Rabbit Biotin/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗生物抗體IgG 0.1ml
GPR110 G蛋白偶聯(lián)受體110抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Avidin/HRP 辣根過氧化物標(biāo)記的兔抗親和 0.1ml
TNFSF4/CD252/FITC 熒光標(biāo)記壞死因子配體超家族成員4抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
BAX(Human Bcl-2 associated X protein) ELISA Kit 人Bcl-2相關(guān)X蛋白Multi-class antibodies： 48T
HINT1 組三聚體核苷結(jié)合蛋白1抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh METTL11A 甲基化樣蛋白11抗體(N端) 0.1ml
CK(Human Creatine Kinase) ELISA Kit 人肌激 96T
RGS21 G蛋白信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白21抗體 0.2ml
C6orf129 6號(hào)染色體開放閱讀框129抗體 0.2ml
HINT1 組三聚體核苷結(jié)合蛋白1抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rabbit Goat IgM/FITC FITC標(biāo)記的兔抗羊IgM 0.3ml
GRASP 一般受體磷肌醇相關(guān)支架蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ADRA2 ADRA2腎上腺能受體2抗體 0.1ml
LILRB3/CD85a/PirB/FITC 熒光標(biāo)記白細(xì)胞球蛋白樣受體-B抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit dog IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗狗IgG 0.1ml
Survivin/FITC 綠色熒光標(biāo)記Survivin蛋白抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
真核生物18S核酸檢測試劑盒48T0.1PCR管頭孢噻吩Cephalothin
醌式利福平Quinone?Li Fuping
林可霉Lincomycin
環(huán)丙沙星雜質(zhì)A（氟喹啉）Ciprofloxacin?impurity A?（fluoroquino
侖氨西林Lenampicillin
利福霉BRifamycin B
6-氨基青霉烷6- aminopenicillanic acid
鹽左氧氟沙星Levofloxacin hydrochloride
阿米卡星雜質(zhì)AAmikacin?impurity A
克拉維鉀Potassium clavulanate
鹽加替沙星Gatifloxacin hydrochloride
頭孢孟多酯Cefamandole Nafate
甲磺加替沙星Gatifloxacin mesylate
利福噴丁Rifapentine
卡那霉BKanamycin B
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