儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

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實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
     Taq酶（2U/μl）            1μl
     DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
      加ddH2O至               50 μl
    視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
利谷?。?biāo)準(zhǔn)品）CDC20 (D6C2Q) Rabbit mAb(三氟甲基)甲酸酯

滅蟻靈（標(biāo)準(zhǔn)品）Sec61A1 (D4K2Z) Rabbit mAb1-(氟基)哌鹽酸鹽

噻草（標(biāo)準(zhǔn)品）Sec61A1 (D7Q6V) Rabbit mAb2-羥基-溴甲酸

甲磺隆標(biāo)準(zhǔn)溶液（10μg/ml,u=4%）MLLT1/ENL (D9M4B) Rabbit mAb1-芐基-基-基哌啶鹽酸鹽

四聚（標(biāo)準(zhǔn)品）COBRA1 (D6K9A) Rabbit mAb7-甲基吲哚-甲

異甲草（標(biāo)準(zhǔn)品）BCL6 (D4I2V) XP® Rabbit mAb(S)-2,5-二氫-3,6-二甲氧基-2-異基吡

甲霜靈（標(biāo)準(zhǔn)品）BCL6 (D4I2V) XP® Rabbit mAbN-羥基脒

標(biāo)準(zhǔn)溶液（100μg/ml,u=4%）MIST1/bHLHa15 (D7N4B) XP® Rabbit mAb溴-7-氮雜吲哚

標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.00mg/ml,基體：甲）MIST1/bHLHa15 (D7N4B) XP® Rabbit mAb溴-甲氧基

甲氧滴滴涕（標(biāo)準(zhǔn)品）USP9X (D4Y7W) Rabbit mAb6-甲基喹喔啉

甲氧隆（標(biāo)準(zhǔn)品）SimpleChIP® Human 28S rDNA Repeat Primers(溴?；?吡啶鹽

滅草隆（標(biāo)準(zhǔn)品）SF2/ASF (D1N3S) Rabbit mAb5-硝基愈創(chuàng)木酚鈉

滅多（標(biāo)準(zhǔn)品）β-Canin (D10A8) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)-6,7-二(2-甲氧基氧基)喹唑啉

煙嘧磺?。?biāo)準(zhǔn)品）HA-Tag (C29F4) Rabbit mAb (PE Conjuga)2-甲硫基并噻唑

戊硫（標(biāo)準(zhǔn)品）SimpleChIP® Human c-Myc Intron 1 Primers二

甲酸銨（色譜級(jí)）Lipin 1 (D2W9G) Rabbit mAb-4'-甲氧基酮

Amberli IR-120陽(yáng)離子交換樹脂（鈉型）Thioredoxin 2 (D1C9L) Rabbit mAb4,5-二氨基-1-(2-羥基)吡唑硫酸鹽

酸戊酯（標(biāo)準(zhǔn)品）SF2/ASF (D6S7V) Rabbit mAb賴諾普利
轉(zhuǎn)基因品系番茄BioScien探針?lè)╭PCR試劑盒25g250mg花寶2號(hào)citrate synthase

胡黃連苷I 訂購(gòu)|咨詢 規(guī)格： HPLC≥98%；20mg/vial 異常凝血酶原/脫-γ-羧基凝血酶原抗體 SYTL2 ELISA Kit 突觸囊泡蛋白樣蛋白2(SYTL2)ELISA試劑盒

5M 化鈉溶液(高壓滅菌) 500ml98665168−20°C干燥避光保存2氨基異丁HPLC≥98%型肝炎病e抗體檢測(cè)試盒10mgSP標(biāo)準(zhǔn)品,中藥標(biāo)準(zhǔn)品, D山梨醇

5g5g花寶2號(hào)Urease

四氫非洲防己;Tetrahydroco 訂購(gòu)|咨詢 規(guī)格： 20mg ELISA Kit for Human Keraticyte proline-rich protein小鼠90kDa熱休克蛋白β1(HSP90β1)ELISA試劑盒，英文名：HSP90β1 ELISA Kit

試,表面活性, 卡特縮合

25g1g花寶1號(hào)Uridine diphosphate

蝙蝠葛苷 訂購(gòu)|咨詢 規(guī)格： 10mg ELISA Kit for Human Cell surface A33 antigen小鼠膜聯(lián)蛋白A2(ANXA2)ELISA試劑盒，英文名：ANXA2 ELISA Kit

標(biāo)準(zhǔn)品,中藥標(biāo)準(zhǔn)品, 補(bǔ)骨脂查爾