DH5α感受態(tài)細胞

DH5α Chemically Competent Cell
產(chǎn)品規(guī)格:

 DH5α感受態(tài)細胞基因型:
F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA
DH5α感受態(tài)細胞簡要說明:
CMbio DH5α菌株是實驗室最常用的感受態(tài)細胞。 缺失核酸內(nèi)切酶(endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍、白斑篩選。DH5α菌株的缺點是生長緩慢，37℃需培12-14小時才能看見克?。蝗缧杓涌煸囼炈俣?，請選用TG1，Mach1-T1，XL10-Gold等生長速度快的感受態(tài)細胞
列DH5α感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率約1×10⁹cfu/μg。
 DH5α感受態(tài)細胞操作說明：

1. CMbio DH5α感受態(tài)細胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時迅速插入冰中），加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

1.  向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)              
  抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少17h。

 DH5α感受態(tài)細胞注意事項：

1.  CMbio 感受態(tài)細胞在冰上融化。
2.  混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。

   3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。

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