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普及工具

蛋白質(zhì)泛素化是一種控制蛋白質(zhì)的調(diào)節(jié)機(jī)制：蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)降解和空間定位，由鏈特異性多泛素化和/或單泛素化介導(dǎo)。Signal Seeker™泛素化工具具有捕獲任何靶蛋白的單泛素化和多泛素化的獨(dú)能力。

使用我們?nèi)娴姆核鼗瘷z測試劑盒輕松研究靶蛋白泛素化：無需質(zhì)譜

廣譜泛素化親和珠富集單泛素化和多泛素化

泛泛素抗體檢測廣泛的泛素化蛋白，包括K48、K63和M1多泛素鏈

Signal Seeker™泛素檢測試劑盒（10次測定）

信號導(dǎo)引頭泛素化檢測試劑盒（10次測定，免疫沉淀格式）

Signal Seeker™生產(chǎn)線的開發(fā)允許專家和非專家對關(guān)鍵的調(diào)節(jié)蛋白修飾進(jìn)行簡單分析。全面的Signal Seeker™試劑盒提供了一個親和珠系統(tǒng)，用于從任何給定的細(xì)胞或組織裂解物中分離和富集修飾蛋白。然后使用靶蛋白的一級抗體通過標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)印跡程序分析富集的蛋白質(zhì)群體

產(chǎn)品用途包括

調(diào)查瞬態(tài)調(diào)節(jié)機(jī)制

測量多途徑成員蛋白的信號事件

發(fā)現(xiàn)感興趣的蛋白質(zhì)的新修飾

深入了解監(jiān)管機(jī)制

測量內(nèi)源性或瞬時表達(dá)的蛋白質(zhì)信號事件

試劑盒內(nèi)容

泛素試劑盒包含以下成分：

裂解和蛋白質(zhì)定量步驟IP和預(yù)澄清步驟洗滌步驟洗脫步驟西方步驟

BlastR™裂解緩沖液

BlastR™稀釋緩沖液

BlastR™過濾器

蛋白酶抑制劑雞尾酒

去泛素酶抑制劑Cocktail

Precision Red™蛋白質(zhì)測定試劑

泛素親和珠

泛素控制珠

BlastR™沖洗緩沖液

旋轉(zhuǎn)柱

珠子洗脫緩沖液

化學(xué)發(fā)光試劑A

化學(xué)發(fā)光試劑B

抗泛素HRP抗體

示例結(jié)果

這些試劑盒有許多應(yīng)用（見下一節(jié)），我們在這里描述Rac1蛋白的一個有趣應(yīng)用：

應(yīng)用1：調(diào)查高度瞬態(tài)調(diào)節(jié)事件

已知包括Rac1在內(nèi)的Rho蛋白家族的活性部分通過泛素化（也稱為泛素化）事件來調(diào)節(jié)，泛素化事件可通過修飾蛋白的降解和/或定位導(dǎo)致信號通路調(diào)節(jié)（Visvikis，O.等人，2010）。生物細(xì)胞102:377-389。Nethe，M.和Hordijik，P.2010。細(xì)胞科學(xué)雜志。123: 4011-4018). 在許多情況下，Rac1的GTP結(jié)合活性形式是泛素化的優(yōu)選底物。例如，已經(jīng)表明用細(xì)菌毒素CNF1處理的細(xì)胞導(dǎo)致Rac1的組成型激活以及隨后的單泛素化和多泛素化（Pop，M.等人，2004。J.生物學(xué)。化學(xué)。279: 35840-35848).

使用Signal Seeker™泛素化檢測試劑盒（Cat#BK161），我們檢測了用CNF1毒素（Cat#CN04）處理的3T3細(xì)胞中內(nèi)源性Rac1的泛素化，發(fā)現(xiàn)從300μg 3T3細(xì)胞裂解物中可以檢測到Rac1的單泛素化和多泛素化。該試劑盒提供了一個用戶友好的工具來檢查任何靶蛋白的單泛素化和多泛素化。

圖1:Swiss 3T3細(xì)胞用MG-132預(yù)處理，然后未處理或用CNF1（CN04）處理3小時，然后用BlastR緩沖液裂解。BK161試劑盒用于在每種條件下對300μg裂解物進(jìn)行IP。泳道1：3μg輸入未處理的裂解物，泳道2：泛素親和珠（UBA01）加未處理的溶胞產(chǎn)物，泳道3：UBA01加CN04處理的裂解產(chǎn)物，泳路4：泛素對照珠（CUB02）加未經(jīng)處理的裂解液，泳道5：CUB02加CN04處理的裂解產(chǎn)物。使用抗Rac1抗體分析樣品的Rac1泛素化。

在這一研究領(lǐng)域可以嘗試的其他實驗包括：

 •參與Rac1單泛素化和多泛素化的泛素酶或去泛素酶的藥理學(xué)研究

 •研究在各種不同生長因子或藥物治療下Rac1激活和泛素化之間的關(guān)系。

 •檢查泛素化Rac1與效應(yīng)物的相互作用。

 •檢查泛素化Rac1和Rac1的其他調(diào)節(jié)性PTM之間的串?dāng)_。

欲了解更多信息，請聯(lián)系： cytoskeleton

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品：

Signal Seeker™磷酸氨酸檢測試劑盒（目錄號BK160）

Signal Seeker™SUMOylation 2/3檢測套件（類別號BK162）

Signal Seeker™：BlastR™快速裂解物制備試劑盒（目錄號BLR01）

Signal Seeker™泛素親和珠（類別號UBA01B珠）

Signal Seeker™：PTMtrue™泛素抗體（目錄號AUB01）

Signal Seeker™乙酰賴氨酸檢測試劑盒（30份測定）

信號導(dǎo)引頭乙?；瘷z測試劑盒（30次測定，免疫沉淀形式）

Signal Seeker™生產(chǎn)線的開發(fā)允許專家和非專家對關(guān)鍵的調(diào)節(jié)蛋白修飾進(jìn)行簡單分析。全面的Signal Seeker™試劑盒提供了一個親和珠系統(tǒng)，用于從任何給定的細(xì)胞或組織裂解物中分離和富集修飾蛋白。然后使用靶蛋白的一級抗體通過標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)印跡程序分析富集的蛋白質(zhì)群體。

產(chǎn)品用途包括

調(diào)查瞬態(tài)調(diào)節(jié)機(jī)制

測量多途徑成員蛋白的信號事件

發(fā)現(xiàn)感興趣的蛋白質(zhì)的新修飾

深入了解監(jiān)管機(jī)制

測量內(nèi)源性或瞬時表達(dá)的蛋白質(zhì)信號事件

驗證數(shù)據(jù)：乙酰賴氨酸檢測試劑盒皮書

這些套件有許多應(yīng)用程序，這里我們描述一個有趣的例子：

應(yīng)用1：使用AAC02珠、AAC03珠或組合珠（AAC04珠）進(jìn)行總乙酰賴氨酸圖譜的免疫沉淀檢測——使用BK163試劑盒時，所有3種選擇都是可能的

使用AAC02珠、AAC03珠和AAC04珠（50µl珠漿）對用脫乙酰酶抑制劑[TSA（1µM）和煙胺（1mM）]處理（+）或未處理（-）的Cos-7細(xì)胞的乙?；鞍走M(jìn)行IP處理6小時。用AAC03-HRP抗體（1:3000）洗脫并通過蛋白質(zhì)印跡分析富集的乙酰化蛋白的總圖譜。使用小鼠IgG珠作為非特異性結(jié)合的對照（Cat#CIG02）。每個IP測定使用1 mg Cos-7裂解物。

應(yīng)用2：使用AAC02珠粒、AAC03珠?；蚪M合珠粒（AAC04珠粒）免疫沉淀靶特異性乙?；鞍?span>——使用BK163試劑盒時，所有3種選擇都是可能的

AAC03珠粒和AAC02珠粒（50µl珠漿）和1:1混合物（各25µl）AAC04珠粒用于脫乙酰酶抑制劑[TSA（1µM）和煙胺（1mM）]處理（+）或未處理（-）的Cos-7細(xì)胞的乙酰化蛋白IP 6小時。使用抗EGFR和抗RhoGDI抗體進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析，并使用LiCor-Empiria軟件對信號進(jìn)行定量。還進(jìn)行IP測定，并對小鼠IgG對照珠的信號進(jìn)行定量（印跡未顯示）。每個IP使用1 mg裂解物。

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