慢病毒包裝試劑盒 Lentiviral Packaging Kit
產(chǎn)品介紹
慢病毒經(jīng)濃縮后,可以高效地將基因穩(wěn)定地整合到宿主基因組中,特別適合用于難以通過常規(guī)方法轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,如神經(jīng)細(xì)胞、干細(xì)胞和免疫細(xì)胞如原代T細(xì)胞等。IPHASE 慢病毒包裝試劑盒提供了慢病毒包裝所需用到的所有試劑,包含了慢病毒包裝質(zhì)?;旌衔風(fēng)entivirus Packaging Plasmid Mix、轉(zhuǎn)染試劑Transfect Reagent、對照質(zhì)粒eGFP Plasmid (AMP+)和慢病毒濃縮液Lentivirus Titer-enhanced Solution,省去了試驗(yàn)前準(zhǔn)備的繁瑣過程,可直接使用,通過使用配套的濃縮液可以有效提高病毒滴度,提高慢病毒轉(zhuǎn)染便利性。試劑盒中各組成成分經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量檢測,實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠、重現(xiàn)性好。
產(chǎn)品詳情
中文名稱:慢病毒包裝試劑盒 Lentiviral Packaging Kit
英文名稱:Lentiviral Packaging Kit
規(guī)格:10 Test
保質(zhì)期:1年
保存條件:A盒——-15~-25℃,B盒——2~8℃
產(chǎn)品關(guān)鍵詞:慢病毒、慢病毒包裝、慢病毒濃縮液、細(xì)胞轉(zhuǎn)染
產(chǎn)品組分:
名稱 | 規(guī)格 | 數(shù)量 |
Lentivirus Packaging Plasmid Mix | 120 μL | 1支 |
eGFP Plasmid | 50μL | 1支 |
Transfect Reagent | 1 mL | 1支 |
Lentivirus Titer-enhanced Solution | 50 mL | 1支 |
使用方法
提前制備轉(zhuǎn)染所需的293T細(xì)胞,使用Transfect Reagent把包裝質(zhì)粒、包膜質(zhì)粒和目標(biāo)DNA eGFP 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染進(jìn)293T細(xì)胞,細(xì)胞轉(zhuǎn)染6h后把培養(yǎng)基更換為完-全培養(yǎng)基,培養(yǎng)48h-72h,收集富含慢病毒顆粒的細(xì)胞上清液,并使用lentivirus titer-enhanced solution對收集的上清液濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液,可在293T細(xì)胞或者慢病毒滴度試劑盒中測定病毒滴度。在一定滴度范圍內(nèi)的慢病毒顆??梢詽M足大部分體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)需求。
1 細(xì)胞準(zhǔn)備
1)將處于對數(shù)增長期的293T細(xì)胞按照6million/皿的兩傳代到100mm培養(yǎng)皿中,置于5%的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),當(dāng)細(xì)胞融合率達(dá)到80%左右時(shí)準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染。
2)轉(zhuǎn)染前1~2 h按照12mL/皿的量為需要轉(zhuǎn)染的細(xì)胞更換新鮮的DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基。
注:293T細(xì)胞貼壁性不好,更換培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)盡量避免沖起293T細(xì)胞。
2 轉(zhuǎn)染
1) 請于冰浴條件下解凍Lenti Packaging Plasmid Mix和eGFP Plasmid,并混合均勻。
注:Lenti Packaging Plasmid Mix和eGFP Plasmid需在-20℃冷凍保存,切勿反復(fù)凍融,若一次用不完,可于第一次化凍后按照需求量分裝并凍存。
2)準(zhǔn)備兩個(gè)1.5ml無菌離心管,分別標(biāo)記為管A和管B,按照以下表格進(jìn)行體系配制:
組分名稱 | 管A | 管B |
DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 0.5 mL | 0.5 mL |
lenti Packaging Plasmid Mix | 10 μL | / |
含目的DNA的質(zhì)粒 | 10 μg | / |
Transfect Reagent | / | 72 μL |
3)混合均勻,并于室溫條件下平衡5min,備用。
4)將管A和管B的溶液合并,混合均勻后于室溫放置 18~20min 。
5)將混合液均勻滴加到預(yù)處理好的293T細(xì)胞培養(yǎng)皿中,放置在 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
6)轉(zhuǎn)染6h~8h后,小心吸掉細(xì)胞培養(yǎng)液棄于盛有消毒液的廢液杯中,然后加15mL完-全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
注:此時(shí)培養(yǎng)基與所用的移液槍頭等都已含有少量的病毒,必須經(jīng)消毒液浸泡處理后才能丟棄。
3 收集與濃縮
1)換液48h~72h后,轉(zhuǎn)移細(xì)胞上清液至50mL離心管,4℃,500g離心5min。
2) 收集離心后上清液,使用0.45μm濾器過濾后至新的離心管中。
3)按1:3比例加入Lentivirus Titer-enhanced Solution進(jìn)離心后的上清液,2℃~8℃冰箱放置過夜。
4)4℃,1500g 離心 60min,棄上清。
5)加入原1/10或1/100的DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基,建議使用轉(zhuǎn)染目標(biāo)細(xì)胞培養(yǎng)基重懸,于-60℃~-90℃冰箱保存。
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原代肝細(xì)胞 Hepatocytes :人、猴、犬、大鼠、小鼠、豬等(貼壁/懸?。?/span>
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誘導(dǎo)金黃地鼠肝S9
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CD3+T細(xì)胞陽選/適配體無痕分選試劑盒
CD4+T細(xì)胞陽選/適配體無痕分選試劑盒
CD8+T細(xì)胞陽選/適配體無痕分選試劑盒
CD19+B細(xì)胞陽選/適配體無痕分選試劑盒
CD14+單核細(xì)胞陽選/適配體無痕分選試劑盒
CD56+NK細(xì)胞陽選/適配體無痕分選試劑盒
匯智和源從匯智泰康獨(dú)立而來,“IPHASE"為核心產(chǎn)品品牌,公司致力于為創(chuàng)新藥研發(fā)企業(yè)及生命科學(xué)研究機(jī)構(gòu)提供高品質(zhì)的試劑產(chǎn)品,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research"。