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細(xì)胞凋亡(Cell Apoptosis)是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同,細(xì)胞凋亡不是一件被動(dòng)的過程,而是主動(dòng)過程,它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用。
細(xì)胞凋亡檢測常用的方法為AnnexinV/PI雙染法流式檢測。其原理為:正常細(xì)胞中,磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè),但在細(xì)胞凋亡早期, PS從細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)至膜表面。Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,可以與磷脂酰絲氨酸特異性結(jié)合,將Annexin V進(jìn)行熒光素(FITC)標(biāo)記作為熒光探針,利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測細(xì)胞早期凋亡的發(fā)生。碘化丙啶(propidine iodide,PI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細(xì)胞膜,無法進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)部,但對凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞,PI 能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核紅染。因此將Annexin V 與PI 匹配使用,就可以將凋亡早晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開來。
細(xì)胞凋亡過程中染色體DNA發(fā)生斷裂,脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)利用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(tdt)的作用將斷裂缺口產(chǎn)生的DNA3'-oh與生物素相連接,使斷裂DNA染色,從而分析凋亡細(xì)胞。
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