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傳代培養(yǎng)是指需要將培養(yǎng)物分割成小的部分，重新接種到另外的培養(yǎng)器皿（瓶）內(nèi)，再進(jìn)行培養(yǎng)的過程。原理：細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長，...

慢病毒構(gòu)建并包裝后，以進(jìn)行貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。具體流程如下：1.對慢病毒基因進(jìn)行改造，即敲除U3端的400bp的特定基因，使其逆轉(zhuǎn)錄和整合的能力，但保留產(chǎn)...

三種擴(kuò)大貼壁細(xì)胞培養(yǎng)的方法：維持其在培養(yǎng)皿表面（2D）的生長狀態(tài)，進(jìn)行傳代培養(yǎng)放大；進(jìn)行貼壁細(xì)胞分離，隨后在發(fā)酵罐的3D培養(yǎng)中進(jìn)行小試到大規(guī)模的逐級放大；采用含...

細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系獲得的具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞。因此，欲構(gòu)建細(xì)胞株，首先需獲得穩(wěn)定的細(xì)胞系。構(gòu)建流程如下：1. 細(xì)胞培養(yǎng)（原核：大腸...

凡是來源于胚胎、組織器官及外周血，經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細(xì)胞稱之為原代細(xì)胞。人或動(dòng)物體內(nèi)（或胚胎組織）由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)...

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生...

酶聯(lián)免疫吸附測定enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)...

ChiRP（Chromatin Isolation by RNA Purification ）是一種檢測與RNA綁定的DNA和蛋白相互作用的方法。該方法是通過設(shè)...

研究DNA結(jié)合蛋白與其靶DNA之間相互作用的主要實(shí)驗(yàn)手段之一。原理及流程如下：鏈親和素磁珠能夠與生物素標(biāo)記DNA/蛋白復(fù)合物結(jié)合。在磁場下或通過離心使結(jié)合物與上...

RNA pull down實(shí)驗(yàn) 檢測RNA結(jié)合蛋白與其靶RNA之間的相互作用。使用體外轉(zhuǎn)錄法標(biāo)記生物素RNA探針，然后與胞漿蛋白提取液孵育，形成RNA-蛋白質(zhì)復(fù)...

熒光素酶報(bào)告基因是指以熒光素（luciferin）為底物來檢測螢火蟲熒光素酶（fireflyluciferase）活性的一種報(bào)告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化lucif...

CHIP-seq，指的是結(jié)合位點(diǎn)分析法，作用為研究體內(nèi)蛋白質(zhì)與DNA相互作用。染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)（Chromatin Immunoprecipitation，...

多肽合成采用逐步縮合定向法以得到具有特定氨基酸順序的多肽，把不需要反應(yīng)的氨基羧基用基團(tuán)保護(hù)起來，再進(jìn)行連接反應(yīng)，保證定向反應(yīng)的順利進(jìn)行。

現(xiàn)如今固相亞磷酰胺三酯法是普遍采用的DNA合成方法，具有高效，快速偶聯(lián)的優(yōu)點(diǎn)。其基本原理是：將核苷酸單體按照3′→5′磷酸二酯鍵鏈接，使其具有天然DNA分子的全...

PCR芯片是經(jīng)過對Q-PCR體系優(yōu)化而開發(fā)的PCR檢測體系?？朔薗-PCR檢測基因表達(dá)數(shù)量少等不足之處，其同時(shí)可對多種基因進(jìn)行研究，且可在更短的時(shí)間內(nèi)得到更豐...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA的片段的分子生物學(xué)技術(shù)。

Northern Blot或稱RNA印跡，是通過測定樣品中的RNA以檢測基因表達(dá)的分子生物學(xué)操作。通過檢測細(xì)胞分化過程中或細(xì)胞在不同環(huán)境條件下特定基因的表達(dá)情況...

蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot）通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細(xì)胞或生物組織樣品進(jìn)行著色，通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組...