ELISA技術(shù)-HRP-Streptavidin，關(guān)于辣根過氧化物酶標(biāo)記原理？

昊然生物分享關(guān)于酶標(biāo)記技術(shù)的相關(guān)知識點：

酶標(biāo)記技術(shù)：Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）。ELISA的原理基于免疫反應(yīng)，因此它常被用于生物醫(yī)學(xué)、生物化學(xué)。

免疫標(biāo)記技術(shù)是將一些既易測定又具有高度敏感性的物質(zhì)標(biāo)記到特異性抗原或抗體分子上，通過這些標(biāo)記物的增強放大效應(yīng)來顯示反應(yīng)系統(tǒng)中抗原或抗體的性質(zhì)與含量。

常用的標(biāo)記物包括熒光素、酶和放射性核素等,用這3種標(biāo)記物進(jìn)行標(biāo)記的免疫檢測技術(shù)被稱為3大免疫標(biāo)記技術(shù)。目前,使用的免疫標(biāo)記物還有化學(xué)發(fā)光物質(zhì)、鐵蛋白和膠體金等。

辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的原理：

辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP )

HRP廣分布于植物界，它是由無色的酶蛋白和棕色的鐵嚇啉結(jié)合而成的糖蛋白，糖含量18%。HRP由多個同功酶組成，分子量為40,000,等電點為pH3~9，酶催化的最適PH因供氫體不同而稍有差異，但多在pH5左右。酶溶于水和58%以下的硫酸銨溶液。HRP的輔基和酶蛋白最大吸收光譜分別為403nm和275nm，一般以O(shè)D403nm / OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表示酶的純度。

HRP的催化反應(yīng)需要底物過氧化氫(H2O2)和供氫體(DH2)。供氫體多為無色的還原型染料，通過反應(yīng)可生成有色的氧化型染料(D)。

辣根過氧化物酶標(biāo)記方法

酶標(biāo)記抗體的制備方法主要有兩種,即戊二醛交聯(lián)法和過碘酸鹽氧化法。

辣根過氧化物酶的標(biāo)記常用過碘酸鹽氧化法,這種方法法只適用于含糖量較高的酶·過碘酸鈉將HRP分子表面的多糖氧化為醛基，醛基與抗體分子上的氨基形成Schiff堿而結(jié)合·后者可進(jìn)一步用NaBH4(或乙醇胺)還原生成穩(wěn)定的酶標(biāo)記抗體。

ELISA技術(shù)通常包括以下幾個步驟：

固定：在一個固定在實驗板上的表面上吸附特定的抗原或抗體，從而形成一個固定層。

洗滌：洗去未結(jié)合的分子，以減少非特異性結(jié)合。

結(jié)合：加入待測樣本（包含要檢測的分子），使待測分子與固定的抗體或抗原發(fā)生特異性結(jié)合。

洗滌：再次洗滌以去除未結(jié)合的分子。

酶標(biāo)記：加入一個與待測分子特異性結(jié)合的酶標(biāo)記物，如辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）。

產(chǎn)品名稱：HRP-Streptavidin，鏈霉親和素，HRP標(biāo)記

中文名稱：

HRP標(biāo)記鏈霉親和素

鏈霉親和素，HRP標(biāo)記

英文名稱：

HRP-SA

HRP-Streptavidin

分類：蛋白標(biāo)記

溶解性：/

規(guī)格：mg

純度：95%+

儲存：/

用途：科研

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