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polyplus轉(zhuǎn)染試劑 jetPRIME®應(yīng)用

閱讀:1403      發(fā)布時間:2023-6-28
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polyplus轉(zhuǎn)染試劑 jetPRIME®應(yīng)用

polyplus轉(zhuǎn)染試劑 jetPRIME®是一種功能強大、用途廣泛的DNA和siRNA轉(zhuǎn)染試劑,用于日常實驗,可產(chǎn)生高效可靠的科學結(jié)果。jetPRIME®確保在各種粘附細胞中具有高的DNA轉(zhuǎn)染效率和優(yōu)異的基因沉默。jetPRIME®也是DNA/siRNA共轉(zhuǎn)染或幾種質(zhì)粒共遞送的理想選擇。此外,jetPRIME®試劑對細胞非常溫和,因為它在轉(zhuǎn)染過程中需要少量的試劑和核酸。

polyplus轉(zhuǎn)染試劑 jetPRIME®應(yīng)用方向多樣,主要的應(yīng)用方向如下:

一、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染

jetPRIME®導致不同來源的轉(zhuǎn)染粘附細胞系以及原代細胞的百分比非常高,如下表:

細胞類型

細胞系

描述

轉(zhuǎn)染效率

上皮細胞

B16-F10

小鼠黑色素瘤

70-80%


BNL-CI2

小鼠正常胚胎肝細胞

50-60%


CaCO2

人結(jié)腸癌上皮

20%


CHO-K1

中國倉鼠卵巢

70%


HCT-116

人結(jié)腸癌

70%


Hela

人宮頸上皮樣癌

70-90%


Hepg2

人肝癌

50-70%


Huh-7

人肝癌

30-50%


MCF-7

人乳腺腺癌

50%


MCF-10A

人乳腺腺癌

40-50%


MDCK

犬腎上皮

20%


PC-3

人類前列腺癌

70%


Vero

非洲綠猴腎

50%

成纖維細胞

COS-7

非洲綠猴腎

60-80%


HEK-293

人胚腎成纖維細胞

80-90%


MRC-5

人胚肺成纖維細胞

50%


NIH-373

小鼠胚胎成纖維細胞

50-70%

成髓細胞

Raw 264.7

小鼠單核巨噬細胞

40-50%

成肌細胞

C2C12

鼠成肌細胞

70-90%

神經(jīng)元

SH-SY5Y

人類神經(jīng)母細胞瘤

70-80%

原發(fā)性肝細胞

人原代肝細胞

20-30%

原發(fā)性黑色素細胞

人原代黑素細胞

40-50%

表1:使用jetPRIME®的各種細胞類型的轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染后24小時通過FACS分析測定GFP陽性細胞的百分比。

質(zhì)粒是常見于細菌中的環(huán)狀DNA小分子。質(zhì)粒與染色體DNA分開存在和復制,在細菌中,質(zhì)粒通常攜帶有利于細菌生存的基因。質(zhì)??梢员挥幸獾匾胨璧募毎校⒂糜谠谔囟毎抵羞^表達感興趣的基因。這一過程被稱為DNA轉(zhuǎn)染,是研究感興趣的基因功能或蛋白質(zhì)的常用方法。

二、基因編輯

CRISPR/Cas9系統(tǒng)在哺乳動物細胞中的使用最近已經(jīng)成為在特定基因座修飾細胞基因組的一種非常方便的方法。它涉及將(a)編碼Cas9的一個或多個質(zhì)粒、特異性gRNA和最終要插入的序列,或(b)一個或兩個質(zhì)粒和RNA分子(gRNA)的混合物瞬時轉(zhuǎn)染到哺乳動物細胞中。

三、siRNA轉(zhuǎn)染

jetPRIME®可使多種細胞系的內(nèi)源性基因表達降低90%以上。例如,jetPRIME®介導的用靶向HeLa細胞中內(nèi)源性層粘連蛋白A/C的10nM siRNA雙鏈體轉(zhuǎn)染HeLa細胞,將層粘連蛋白/C基因表達顯著降低到幾乎無法檢測的水平。

image.png

圖1:使用jetPRIME®的內(nèi)源性層粘連蛋白A/C沉默。用10nM的21-mer層粘連蛋白A/C siRNA轉(zhuǎn)染HeLa細胞。48小時后,使用抗層粘連蛋白A/C的抗體通過免疫熒光顯微鏡評估層粘連蛋白/C沉默。

四、不同核酸的共轉(zhuǎn)染

jetPRIME®非常適合DNA和siRNA/miRNA共轉(zhuǎn)染實驗或幾種DNA質(zhì)粒的共遞送,用jetPRIME®進行了DNA和siRNA

送,并在各種毒性極低的細胞系中觀察到高效的基因沉默。使用10nM的siRNA,在貼壁細胞中實現(xiàn)了超過90%的沉(圖2)。

image.png

圖2:使用jetPRIME®進行DNA和siRNA共轉(zhuǎn)染后,幾種細胞系中的外源性螢光素酶沉默。在6孔板中用每孔400ng p4CMV Luc和10nM熒光素酶siRNA進行實驗。

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