試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病毒抗體的包被微孔中，依次加入標本、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病毒（REV）的存在與否。

禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病毒(REV)ELISA檢測試劑盒 有三個必要的試劑：

【免疫吸附試劑】、【結(jié)合物】、【酶的底物】

1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）

2）酶標記的抗原或抗體（結(jié)合物/二抗）

3）酶的底物：A+B

4) 陰性對照品和陽性對照品，參考標準品（一抗）

5）結(jié)合物和標本的稀釋液

6）洗滌液（PBST）

操作步驟:

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置陰、陽性對照孔和樣本孔，陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL；

3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加稀釋液40μL；

4.  隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病毒(REV)ELISA檢測試劑盒 結(jié)果判斷

1.  試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；

陰性對照孔OD值平均值≤0.15。

2.  臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

4.  陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性