樣本處理及要求：

1.  血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2.  血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3. 細胞培養(yǎng)物上清：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

樣品保存：樣品收集后若在1周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃（1個月內(nèi)檢測），或-80℃（6個月內(nèi)檢測），避免反復(fù)凍融，標本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

二.   96T試劑盒組成及其配置：人鉤端螺旋體抗體(Lep-Ab)ELISA檢測試劑盒

①微孔酶標板（ 12 孔×8 條）；

②陰性對照 0.5mL；

③陽性對照 0.5mL；

④檢測抗原-HRP 10mL；

⑤20×洗滌緩沖液 25mL；

⑥稀釋液 6mL；

⑦底物 A 6mL；

⑧底物 B 6mL；

⑨終止液 6mL；

⑩封板膜 2 張；說明書 1 份；自封袋 1 個.

備注：20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。

三.   使用注意事項：

1. 本試劑盒取出的試劑在室溫條件下使用，溶液應(yīng)輕輕搖勻后使用。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，加熱使結(jié)晶溶解后再配制。

2. 底物液使用前建議先行檢查，若溶液顏色發(fā)藍則已失效，棄去。

3. 預(yù)處理后的樣本請按照操作步驟用稀釋液適當稀釋以達到試劑盒的的最佳檢測效果。4. 本嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5. 板條開封后剩余板條要密封好，保持板條干燥。

6. 不同批號的試劑盒組分不能混用。7.正確拿酶標板：不要接觸板的底部，否則會影響度數(shù)。

四. 人鉤端螺旋體抗體(Lep-Ab)ELISA檢測試劑盒結(jié)果判斷

 1.  試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；

                陰性對照孔OD值平均值≤0.15。

2.  臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

4.  陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性