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背景介紹： 萬古霉素(Vancomycin，VCM) 是支鏈的三環(huán)糖基化非核糖體 肽，可直接作用于細菌細胞壁前體羧基末端的D-丙氨酰-D-丙氨 酸，抑制細胞壁蛋白的合成，革蘭陽性菌對萬古霉素敏感，因 此對VCM對該類細菌有較強的殺菌作用，所以，它是目前治療 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus，MRSA)和耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)等所致 重癥感染的抗生素，在臨床治療學上占據(jù)重要地位。臨床 上常常進行靜脈給藥全身應用萬古霉素以治療敏感菌感染，但 這種用藥方式經(jīng)常損害人體肝臟、腎臟等重要組織器官，造 成比較嚴重的副反應。傳統(tǒng)上，萬古霉素被用作“后一線藥 物”，用來治療所有抗生素均無效的革蘭氏陽性菌的嚴重感 染。因此，為個體化給藥方案提供理論依據(jù)，避免給危重病人 帶來更加嚴重的副反應，實現(xiàn)萬古霉素的準確定量的意義重 大。

由于每個個體之間年齡、性別、健康狀況等都存在差異性，會 導致患者體內(nèi)萬古霉素的血藥濃度的個體間偏差較大。而通過 治療藥物監(jiān)測 (Therapeutic drug monitoring, TDM)可以幫助醫(yī)生 制定個體化用藥方案。給藥時，劑量將依據(jù)患者的血液濃度作 調(diào)整，使患者在不良反應風險較小的條件下獲得較好的療效。 給藥期間定時監(jiān)測血藥濃度有助于降低不良反應發(fā)生的風險。 當患者病情得到較好的控制而血藥濃度過高，可以根據(jù)醫(yī)囑相 應地減低劑量，降低不良反應風險；若患者病情不能得到控 制，血藥濃度的結(jié)果還可以幫助醫(yī)生調(diào)整用藥劑量，以獲得更 好的療效。

 方法介紹及優(yōu)勢 本文在新款智能Vanquish Core雙三元液相系統(tǒng)上開發(fā)OnlineSPE自動化樣品前處理的液相色譜分析方法，用于監(jiān)測血 清中萬古霉素含量。該方法具有靈敏度高、重現(xiàn)性好、耗時短 等特點。從萬古霉素的線性范圍、重復性測試，到血清的加標 測試，對血清中的萬古霉素進行了完整的定量分析，系統(tǒng)地為 臨床個性化、更合理、更安全地用藥提供一定的依 據(jù)，提升臨床的藥物依從性，給患者提供更好的療效。

 實驗方法 1. 實驗部分 1.1 儀器與試劑 1.1.1 Thermo Vanquish Core 高效液相色譜系統(tǒng) Vanquish Core DGLC高效液相色譜系統(tǒng)包括帶在線脫氣單元的 雙三元梯度泵、等度泵、自動進樣器（1000 µL 進樣環(huán)）、柱 溫箱 (含一個Viper Only 2p-6p切換閥) 和DAD檢測器（含13 µL流 通池；CDS變色龍色譜軟件版本為7.2.10。 1.1.2 試劑及標準品 乙腈、甲醇 (色譜級，F(xiàn)isher公司)，去離子水(18.2MΩ，Millipore 純水機)，磷酸（分析純AR，國藥集團），鹽酸萬古霉素 ( 96.5%，DR. EHRENSTORFER) 1.1.3 樣品溶液制備 標樣的配制：用水溶解，配置萬古霉素儲備液100 mg/L，并用 50%甲醇水稀釋至需要濃度的溶液。加標血清制備：用移液槍準確吸取1000 µL空白血清，分別加入 適量萬古霉素稀釋標準溶液，配置成需要濃度的加標血樣。 血液樣品的配制：準確吸取1.00 mL血清于10 mL離心管中，加 入3 mL沉淀試劑，渦旋混合20 s，12000 r/min下離心10 min， 取上層清液過0.22 µm水相膜加入進樣小瓶，等待進樣。

 1.2.2 色譜分析條件 色譜柱：Thermo Hypersil GOLDTM aQ色譜柱（150 mm * 4.6 mm，5 μm） 萃取柱：SPE TDM柱 (重慶大學藥學院合作實驗室提供) 柱溫：30 ℃； DAD ：檢測波長210 nm DGLC左泵（分析泵）流動相A：乙腈，流動相B： 1000 mL水 溶液(50 μL磷酸) 

 精密吸取1mL空白血清，分別加入適量萬古霉素稀釋標準溶，配置成不同濃度的標準溶液，標準品濃度分別為0.502、1.004、 2.008、5.020、10.04 和 20.08 μg/mL，進樣體積為200 μL。圖5所示為標準曲線，線性回歸方程為 Y=0.8161X-0.1251 ，R2=0.9991，表 明在0.502 - 20.08 μg/mL 濃度范圍內(nèi)線性良好，同時該方法空白血清樣品在萬古霉素出峰位置（5.41 min）無基質(zhì)干擾。由于萬 古霉素-甲醇水（1:1）標準溶液和血清樣品溶劑差異較大，建議標準品的加入體積不超過血清樣品體積的5%。

結(jié)論 本文采用Vanquish Core DGLC自動化樣品前處理的Online-SPE 方法，借助HPLC-DAD分析，開發(fā)了監(jiān)測血清中抗生素類 藥物萬古霉素的方法。該方法具有靈敏度高、重現(xiàn)性好和耗時 短等特點。結(jié)果顯示，此方法測定萬古霉素的線性范圍寬，在 0.502-20.08 ug/ml范圍內(nèi)保持線性良好，保留時間 RSD＜0.1% ，峰面積 RSD＜1.5%，結(jié)果表明該方法重復性好，準確度高， 且回收率在90.0%-115.0%，可用于定量分析血清中的萬古霉 素，系統(tǒng)地為臨床個性化、更精準、更合理、更安全地用藥提 供可靠依據(jù)。