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超低殘留分子酶，病原檢測和生物制品質(zhì)控試劑盒開發(fā)利器！

來源：翌圣生物科技（上海）股份有限公司   2023年08月23日 17:26  

精品推薦 | UCF.ME超低殘留分子酶，病原檢測和生物制品質(zhì)控試劑盒開發(fā)利器！

近年來全球感染性疾病的發(fā)病率有所上升，病原體呈現(xiàn)多樣化和復(fù)雜化的發(fā)展趨勢，半數(shù)患者存在病原體不明的困境，病原體的快速診斷面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。目前用于臨床病原體檢測的方法主要包括傳統(tǒng)培養(yǎng)法、PCR法、宏基因組測序（mNGS）、病原靶向測序（tNGS）等。新冠核酸檢測讓熒光PCR技術(shù)大放異彩，新冠之后mNGS因抗疫揚名，一度被臨床醫(yī)生所青睞，逐步走向?qū)こ０傩占?。tNGS靶向測序技術(shù)更是異軍突起，以其對“PCR”和“NGS”兼容并蓄的優(yōu)勢和快速、精準(zhǔn)、高性價比的測序服務(wù)，在臨床檢驗領(lǐng)域正受到越來越多的關(guān)注和使用。

 

表1.病原體檢測方法比較

 

另一方面，生物制品已應(yīng)用到生物醫(yī)藥、生物農(nóng)業(yè)、生物能源、生物制造、生物環(huán)保等多種領(lǐng)域。隨著生物制品的市場占比越來越大，針對生物制品，國家和相關(guān)部門也建立起規(guī)范的質(zhì)量管理體系和標(biāo)準(zhǔn)，其中宿主細(xì)胞核酸殘留問題是備受關(guān)注的焦點之一。生物制品如重組蛋白藥、抗體藥、疫苗、細(xì)胞與基因藥物等產(chǎn)品是用連續(xù)傳代的菌種株/細(xì)胞株表達(dá)的，因而產(chǎn)品內(nèi)可能會殘存宿主核酸。殘留的宿主細(xì)胞核酸可能引發(fā)細(xì)胞因增殖失控變?yōu)槟[瘤細(xì)胞，也有可能存在感染性病毒基因從而加劇體內(nèi)免疫反應(yīng)。為了規(guī)避上述不良后果，從生物制品安全角度和科研需求的層面，進(jìn)行有效的核酸殘留去除與嚴(yán)格的殘留檢測非常重要，行業(yè)內(nèi)已廣泛應(yīng)用qPCR/RT-qPCR方法開發(fā)用于檢測生物制品中的宿主核酸殘留檢測試劑盒。

 

（點擊可查看大圖）

圖1 生物制品宿主核酸殘留質(zhì)控產(chǎn)品一覽

 

由于商業(yè)化分子酶主要采用工程菌株（如大腸桿菌等）進(jìn)行重組表達(dá)，因此分子酶中會存在一定量的宿主基因組DNA殘留。加上制備環(huán)境和人源等因素影響，分子酶制品中極易存在污染DNA。

在病原體檢測過程中，污染的背景菌核酸可能會淹沒低豐度的靶標(biāo)核酸或和靶標(biāo)核酸一起被檢出，從而影響靶標(biāo)檢出靈敏度或造成假陽性結(jié)果，給醫(yī)生診斷和用藥造成困擾。

 

在宿主核酸殘留質(zhì)控產(chǎn)品研發(fā)生產(chǎn)過程中，分子酶中若存在殘留宿主（如人源、鼠源、大腸桿菌、酵母等）核酸，極可能造成宿主核酸殘留質(zhì)控產(chǎn)品定量不準(zhǔn)確，從而給生產(chǎn)的生物制品帶來安全隱患。

 
 
 

翌圣UCF.ME®超低殘留分子酶解決方案

 
 
為解決病原檢測背景菌及宿主核酸殘留干擾問題，翌圣已建立完善的UCF.ME®超低殘留分子酶研發(fā)、生產(chǎn)平臺，通過物料、環(huán)境、工藝、過程、質(zhì)量等多環(huán)節(jié)把控，目前已實現(xiàn)多種UCF.ME®超低殘留分子酶的規(guī)模化生產(chǎn)。（欲了解更多工藝細(xì)節(jié)，請戳：翌圣超低殘留分子酶解決tNGS/mNGS背景菌干擾）
 

 

 
 

ISO認(rèn)證超潔凈分子酶生產(chǎn)基地-UCF.ME

 
 

（點擊可查看大圖）

圖2.翌圣UCF.ME®超潔凈分子酶生產(chǎn)基地

 

 
 

翌圣UCF.ME®超低殘留分子酶產(chǎn)品

 
 
翌圣通過ZymeEditor™酶改造平臺對qPCR/RT-qPCR、NGS建庫全套分子酶進(jìn)行改造，同時使用UCF.ME®超低殘留工藝對分子酶產(chǎn)品進(jìn)行處理，目前可規(guī)?；峁┯糜趒PCR/RT-qPCR檢測，NGS建庫的全套高性能、超低宿主殘留分子酶原料，助力解決病原檢測及宿主核酸殘留質(zhì)控產(chǎn)品中的宿主及背景菌核酸干擾，提高檢測準(zhǔn)確度。
 

 

表2.翌圣UCF.ME®超低殘留分子酶產(chǎn)品清單

 

 
 

部分?jǐn)?shù)據(jù)展示

 
 
以UCF.ME® Hotstart Sensitive Taq DNA Polymerase為例
 
E. coli基因組DNA殘留＜0.005 copies/U
 
 
對不同批次的翌圣UCF.ME® Taq酶（Cat#14314ES）進(jìn)行E. coli基因組DNA殘留檢測，結(jié)果顯示Taq DNA聚合酶宿主基因組DNA殘留遠(yuǎn)低于0.005 copies/U。

圖3.翌圣UCF.ME® Taq酶（Cat#14314ES）E.coli基因組DNA殘留檢測

 

 
質(zhì)粒DNA殘留無檢出，優(yōu)于進(jìn)口品牌
 
 
 

使用翌圣UCF.ME® Taq酶（Cat#14314ES）及進(jìn)口品牌A的Taq DNA聚合酶進(jìn)行質(zhì)粒DNA殘留檢測，結(jié)果顯示，進(jìn)口品牌A的Taq DNA聚合酶中存在質(zhì)粒DNA殘留，翌圣UCF.ME® Taq酶（Cat#14314ES）中無質(zhì)粒DNA檢出。

圖4.質(zhì)粒DNA殘留檢測結(jié)果

 

 
11種常見背景菌無檢出
 
 

使用翌圣UCF.ME® Taq酶（Cat#14314ES）搭配銅綠假單胞菌，鮑曼不動桿菌，粘質(zhì)沙雷氏菌，肺炎克雷伯菌，嗜麥芽窄食單胞菌，肺炎鏈球菌，屎腸球菌，金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，糞腸球菌，白色念珠菌特異性引探對NTC（No Template Control）進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，翌圣UCF.ME® Taq酶（Cat#14314ES）中無以上11種常見背景菌檢出。

 

圖5.11種常見背景菌檢測結(jié)果（限于篇幅，以銅綠假單胞菌，鮑曼不動桿菌，粘質(zhì)沙雷氏菌，肺炎克雷伯菌為例進(jìn)行展示）

 

 
客戶測試案例展示
 
 

客戶分別使用市售常規(guī)Taq酶和翌圣UCF.ME® Taq酶（Cat#14314ES）搭配客戶E. coli特異性引探對NTC進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示市售常規(guī)Taq酶在22次重復(fù)實驗中出現(xiàn)5次起峰，而翌圣UCF.ME® Taq酶（Cat#14314ES）在22次重復(fù)實驗中均未起峰，結(jié)果表明翌圣UCF.ME® Taq酶（Cat#14314ES）未檢出E. coli基因組DNA。

圖6：E.coli 基因組DNA殘留檢測（客戶測試案例）

左圖：市售常規(guī)Taq酶；右圖：翌圣UCF.ME®Taq酶（Cat#14314ES）

 

 
 

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