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產(chǎn)品展廳

產(chǎn)品求購(gòu)企業(yè)資訊會(huì)展

發(fā)布詢價(jià)單

化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>試劑標(biāo)物>行業(yè)專用試劑>生物試劑>10923ES 通用型一步法無(wú)縫克隆試劑盒(用于同源重組)

10923ES 通用型一步法無(wú)縫克隆試劑盒(用于同源重組)

參考價(jià)655.00
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
產(chǎn)品標(biāo)簽

One Step Cloning Kit同源重組

規(guī)格
20T655.00元99 件可售

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企業(yè)簡(jiǎn)介

翌圣生物科技(上海)股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白質(zhì)改造和酶進(jìn)化技術(shù)為驅(qū)動(dòng),聚焦生命科學(xué)產(chǎn)業(yè)鏈上游核心原料,從事分子、蛋白和細(xì)胞三大品類生物試劑的研發(fā)、生產(chǎn)與銷售的高新技術(shù)企業(yè),通過打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細(xì)胞的技術(shù)開發(fā)路徑,成為國(guó)內(nèi)少數(shù)同時(shí)覆蓋三大品類生物試劑、兼?zhèn)浜诵募夹g(shù)自主研發(fā)能力和規(guī)模化生產(chǎn)能力的高新技術(shù)企業(yè),產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究領(lǐng)域、診斷與檢測(cè)領(lǐng)域和生物醫(yī)藥領(lǐng)域。



主營(yíng)業(yè)務(wù)


公司憑借在蛋白質(zhì)改造和酶進(jìn)化領(lǐng)域的技術(shù)優(yōu)勢(shì)和深耕生物試劑行業(yè)多年積累的豐富經(jīng)驗(yàn),構(gòu)建了品質(zhì)優(yōu)良、類型齊全、種類豐富的產(chǎn)品管線。自公司成立以來,公司研發(fā)、生產(chǎn)和銷售的生物試劑超過3000種,涵蓋分子、蛋白、細(xì)胞三大品類的生物試劑,能夠滿足客戶多種類型生物試劑的一體化采購(gòu)需求。公司核心產(chǎn)品覆蓋qPCR系列、NGS系列、逆轉(zhuǎn)錄系列、核酸提取與純化系列、PCR系列、分子克隆系列、體外轉(zhuǎn)錄系列、抗體、蛋白純化系列、蛋白分析系列、重組蛋白、細(xì)胞分析系列、細(xì)胞培養(yǎng)系列、細(xì)胞轉(zhuǎn)染系列、報(bào)告基因檢測(cè)系列等多個(gè)品類的生物試劑,廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究、診斷檢測(cè)和生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。

發(fā)展歷程



榮譽(yù)資質(zhì)


翌圣生物通過申請(qǐng)商標(biāo)和軟件著作權(quán)的方式保障核心技術(shù)和市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力,不斷加強(qiáng)公司品牌建設(shè)。截至2022年3月31日,公司已經(jīng)獲得授權(quán)18項(xiàng)(其中發(fā)明14項(xiàng)、實(shí)用新型1項(xiàng)、外觀設(shè)計(jì)3項(xiàng))和45項(xiàng)與生物試劑相關(guān)的軟件著作權(quán),擁有經(jīng)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局商標(biāo)局核準(zhǔn)的注冊(cè)商標(biāo)權(quán)37項(xiàng)以及4項(xiàng)境外注冊(cè)商標(biāo),是國(guó)家高新技術(shù)企業(yè)和上海市專精特新企業(yè)。

榮譽(yù)風(fēng).jpg


創(chuàng)新平臺(tái)


經(jīng)過多年的產(chǎn)品研發(fā)技術(shù)經(jīng)驗(yàn)的沉淀以及持續(xù)的研發(fā)創(chuàng)新,翌圣生物積極開展“產(chǎn)學(xué)研”合作,與擁有生物催化與酶領(lǐng)域國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的湖北大學(xué)、擁有教育部工業(yè)生物領(lǐng)域重點(diǎn)研究基地的江南大學(xué)展開合作,優(yōu)化生物試劑關(guān)鍵原料的生產(chǎn)和表達(dá)工藝。翌圣生物以基因工程技術(shù)、生物信息技術(shù)、細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)、免疫學(xué)技術(shù)、生化分析技術(shù)等生命科學(xué)領(lǐng)域的共性生物技術(shù)為基礎(chǔ),建立了六大核心技術(shù)平臺(tái)——雙向分子酶理性設(shè)計(jì)與定向進(jìn)化平臺(tái)、密度發(fā)酵與超潔凈純化平臺(tái)、分子診斷試劑關(guān)鍵原料研發(fā)平臺(tái)、高通量測(cè)序建庫(kù)試劑創(chuàng)新研發(fā)平臺(tái)、高性能單克隆抗體研發(fā)平臺(tái)和mRNA醫(yī)藥應(yīng)用研發(fā)平臺(tái),目前已經(jīng)自主研發(fā)出20項(xiàng)核心技術(shù),打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細(xì)胞的技術(shù)開發(fā)路徑,覆蓋技術(shù)研發(fā)、產(chǎn)品升級(jí)、規(guī)模生產(chǎn)和質(zhì)量控制等生物試劑研發(fā)和生產(chǎn)的各關(guān)鍵環(huán)節(jié)。


拼圖6.jpg


工業(yè)化生產(chǎn)


翌圣生物擁有按照準(zhǔn)GMP 標(biāo)準(zhǔn)建設(shè)運(yùn)營(yíng)的工業(yè)化生產(chǎn)基地,配有噸級(jí)發(fā)酵線、工業(yè)級(jí) AKTA 純化線和全自動(dòng)包裝線。同時(shí),公司通過了ISO 13485:2016質(zhì)量管理體系認(rèn)證,從原料控制、生產(chǎn)管理、質(zhì)檢管控、倉(cāng)儲(chǔ)運(yùn)輸?shù)葘?duì)生產(chǎn)線進(jìn)行360度管理監(jiān)督,保證產(chǎn)品過程的可控制性及可追溯性,竭盡全力為您提供可靠的產(chǎn)品。

工業(yè)化生產(chǎn).jpg


客戶服務(wù)


翌圣生物憑借優(yōu)質(zhì)穩(wěn)定的產(chǎn)品質(zhì)量、高效及時(shí)的響應(yīng)能力、快速穩(wěn)定的交付能力和周到完備的售后服務(wù)獲得了眾多科研用戶和工業(yè)用戶的認(rèn)可,為檢測(cè)公司、治療公司、工具類公司和科學(xué)研究實(shí)驗(yàn)室提供應(yīng)用于科學(xué)研究、體外診斷、基因測(cè)序、生物醫(yī)藥等的生物試劑。與中國(guó)科學(xué)院、清華大學(xué)、北京大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)、浙江大學(xué)等頂尖科研院所和華大基因、恒瑞醫(yī)藥、藥明康德、之江生物、圣湘生物、斯微生物、金斯瑞、思路迪等工業(yè)客戶建立了穩(wěn)定、緊密的合作關(guān)系,公司產(chǎn)品被多次使用在Nature、Science、Cell等國(guó)際頂級(jí)期刊論文發(fā)表中。

圖片222.jpg

公司企業(yè)文化



使命

幫助客戶創(chuàng)造價(jià)值,讓世界更健康更快樂

愿景

成為生命科學(xué)工具領(lǐng)域全球Top⑩
具備驅(qū)動(dòng)產(chǎn)業(yè)變革的技術(shù)創(chuàng)新能力
擁有一支持續(xù)學(xué)習(xí)型的翌圣鐵軍


價(jià)值觀


價(jià)值.png


翌圣生物始終秉承“幫助客戶創(chuàng)造價(jià)值,讓世界更健康更快樂”的使命,專注于技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品升級(jí),不斷拓展核心技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域,為客戶提供更為的產(chǎn)品與服務(wù),助力我國(guó)打造自主可控的生物試劑產(chǎn)業(yè)鏈。同時(shí),翌圣生物將進(jìn)一步推進(jìn)國(guó)際化戰(zhàn)略,繼續(xù)布局和拓展海外市場(chǎng),為全球生物試劑產(chǎn)業(yè)發(fā)展貢獻(xiàn)力量。










分子生物學(xué)試劑,細(xì)胞生物學(xué)試劑,免疫學(xué)試劑,蛋白組學(xué)試劑等

供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

Hieff Clone® Universal II One Step Cloning Kit是新一代的同源重組克隆試劑盒,精心優(yōu)化的第二代2× Hieff Clone® Universal II Enzyme Premix預(yù)混了重組酶和重組反應(yīng)所需緩沖液,并添加了的重組增強(qiáng)因子,用于同源重組可顯著提高重組克隆效率。

該試劑盒可以將PCR產(chǎn)物定向克隆至任何載體的任何位點(diǎn),兼容未純化PCR產(chǎn)物、直接回收的PCR產(chǎn)物、低濃度的膠回收產(chǎn)物,本產(chǎn)品可重組同源臂GC含量30%-70%的接頭片段。將載體線性化,并在插入片段正、反向PCR引物5’端引入15-25 bp的線性化載體末端同源序列,使得插入片段PCR產(chǎn)物5’和3’末端分別帶有與線性化載體兩末端對(duì)應(yīng)的一致的序列。PCR產(chǎn)物和線性化載體在重組酶的作用下,在50℃條件下最快僅需5 min即可完成重組反應(yīng)??寺£?yáng)性率可達(dá)95%以上。

 

組分信息

組分編號(hào)

組分名稱

10923ES05

10923ES20

10923ES50

10923-A

× Hieff Clone® Universal II Enzyme Premix

50 μL

200 μL

500 μL

10923-B

500 bp control insert (25 ng/μL)

5 μL

5 μL

5 μL

10923-C

pUC 19 control vector, linearized (50 ng/μL)

5 μL

5 μL

5 μL

 

儲(chǔ)存條件

-25~-15℃保存,有效期1年。

 

簡(jiǎn)版使用說明

 1.重組反應(yīng)

   1)線性化載體和插入片段使用量

Hieff Clone®重組反應(yīng)體系各個(gè)片段載體插入總濃度0.02 - 1 pmol。載體與各個(gè)插入片段摩爾比為1:2*。對(duì)應(yīng)的DNA質(zhì)量可由以下公式計(jì)算獲得:

pmol = (插入片段使用量ng) × 1,000 / (插入堿基對(duì)數(shù) × 650 daltons)
50 ng 5,000 bpDNA片段約為0.015 pmol
50 ng 500 bpDNA片段約為0.15 pmol

*當(dāng)插入片段長(zhǎng)度大于載體時(shí),最適載體與插入片段使用量的計(jì)算方式應(yīng)互換,即插入片段當(dāng)做載體,載體當(dāng)做插入片段進(jìn)行計(jì)算。線性化載體及插入片段反應(yīng)終濃度可達(dá)到1 ng/μL。線性化載體和插入片段擴(kuò)增產(chǎn)物未純化直接使用時(shí),使用總體積應(yīng)不超過反應(yīng)體系體積的1/5,如20 μL體系不超過4 μL。

簡(jiǎn)便的投入量計(jì)算公式:插入片段投入量=2×插入片段長(zhǎng)度×插入載體投入質(zhì)量/載體長(zhǎng)度

 2)重組反應(yīng)體系(可等比擴(kuò)大或縮減反應(yīng)體系,冰上配制,各組分使用前需混勻)

組分

重組反應(yīng)體系

2× Hieff Clone® Universal II Enzyme Premix

10 μL

每個(gè)插入片段投入量

X

目的載體投入量

Y

ddH2O

To 20 μL

1 反應(yīng)體系

3)重組反應(yīng)條件

  1. 體系配制完成后,用移液器輕輕吸打混勻各組分,短暫離心將反應(yīng)液收集至管底。

  2. 當(dāng)插入1個(gè)片段時(shí),應(yīng)條件為50℃,5 min;當(dāng)插入片段數(shù)為2-6個(gè)時(shí),建議反應(yīng)條件為50℃,10 -50 min反應(yīng)時(shí)間隨片段數(shù)增多而延長(zhǎng),如表2所示。超長(zhǎng)載體片段連接,建議反應(yīng)時(shí)間為40-60 min。

連接片段數(shù)

重組反應(yīng)時(shí)間

2

10 min

3

20 min

4

30 min

5

40 min

6

50 min

2 反應(yīng)時(shí)間

  1. 反應(yīng)產(chǎn)物可直接進(jìn)行轉(zhuǎn)化,也可儲(chǔ)存于-20℃,待需要時(shí)解凍轉(zhuǎn)化。

  1. 轉(zhuǎn)化

  1. 提前15分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到37℃預(yù)熱。

  2. 在冰上解凍快速克隆感受態(tài)細(xì)胞(如:DH5α Fast Chemically Competent Cell,Cat#11803ES)。

  3. 10 μL冷卻重組產(chǎn)物,加入到100 μL感受態(tài)細(xì)胞中,輕彈管壁數(shù)下混勻,在冰上放置5 min。

  4. 200 μL移液槍將上一步的混合物轉(zhuǎn)移到已經(jīng)37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上,均勻涂布。

  5. 將平板置于37℃培養(yǎng)箱倒置過夜培養(yǎng)。若進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,平板在37℃至少倒置培養(yǎng)15 h。

  1. 克隆鑒定

快捷的方法是菌落PCR。用無(wú)菌的槍頭或牙簽將單個(gè)菌落挑至菌落PCR Mix中混勻(如:2×Hieff® Ultra-Rapid HotStart PCR Master Mix (with Dye),Cat#10157ES),加入引物直接進(jìn)行PCR反應(yīng)。推薦至少使用一條通用測(cè)序引物進(jìn)行菌落PCR,可以避免PCR假陽(yáng)性的產(chǎn)生。后續(xù)也可用于酶切或測(cè)序鑒定。

 

注意事項(xiàng)

1.需自備的材料:

     1)自備樣品:自備好線性化載體和插入片段。

     2)自備試劑(僅羅列部分):

  1. 超級(jí)感受態(tài):轉(zhuǎn)化效率>108 cfu/μg,如翌圣DH5α快速化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞(Cat#11803ES)。

  2. 高保真酶:2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (With Dye)(Cat#10164ES或其他等效產(chǎn)品。

  3. 菌落PCR mix:2× Hieff® Ultra-Rapid HotStart PCR Master Mix (with Dye)(Cat#10157ES)或其他等效產(chǎn)品。

  4. 核酸染料:YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water)(Cat#10202ES)或其他等效產(chǎn)品。

     3)自備儀器耗材(僅羅列部分):PCR儀,水平電泳槽,切膠儀,EP管等。

2. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

3. 本產(chǎn)品僅作科研用途!

 




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