參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:肺炎克雷伯菌染料法熒光定量PCR試劑盒50次
產(chǎn)品貨號(hào):FS-P013566
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品分類:純化試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書(shū)要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解,樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè);樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書(shū)相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
Kv3.3/Kcnc3/FITC 熒光標(biāo)記離子通道蛋白Kv3.3抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
SMC1/FITC 熒光標(biāo)記染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白質(zhì)1抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh albumin/AFM 人血清白蛋白抗體 0.2ml
Rabbit human IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗人IgG 0.5ml
GPR101 G蛋白偶聯(lián)受體101抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Guinea pig IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗豚鼠IgG 0.1ml
SMC1/FITC 熒光標(biāo)記染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白質(zhì)1抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
AP13(Human apelin 13) ELISA Kit 人apelin 13Multi-class antibodies: 48T
P53(wt-p53) 抑制基因抗體(野生型P53)Multi-class antibodies: 0.1ml
Rhesus antibody Rh HSP90 α 熱休克蛋白90α抗體 0.2ml
IgA ELISA Kit 大鼠球蛋白A 96T
Proinsulin 胰島原抗體 0.1ml
CNKSR1 Ras激抑制因子連接增強(qiáng)蛋白1抗體 0.2ml
P53(wt-p53) 抑制基因抗體(野生型P53)Multi-class antibodies: 0.1ml
Donkey Goat IgG/PE PE標(biāo)記的驢抗羊IgG 0.1ml
Gliadin 蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ASB7 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族7抗體 0.2ml
HSP-90 Alpha/FITC 熒光標(biāo)記HSP-90α蛋白抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit mouse IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 0.1ml
SIAH2/FITC 熒光標(biāo)記泛連接Siah2抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
肺炎克雷伯菌染料法熒光定量PCR試劑盒50次焦土鏈霉菌種屬: Streptomyces│showdoensis分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: yes應(yīng)用領(lǐng)域: Type strain. Produces actinomycin, macrolide antib培養(yǎng)基: 0038生長(zhǎng)條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
嗜熱一氧化碳鏈霉菌種屬: Streptomyces│thermocarboxydus分離基物: 私用園地土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: yes應(yīng)用領(lǐng)域: 分類學(xué)研究、質(zhì)量控制培養(yǎng)基: CM0075生長(zhǎng)條件: 45℃存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
蘇云金芽孢桿菌種屬: Bacillus│thuringiensis分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0002生長(zhǎng)條件: 30℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
塔賓曲霉種屬: Aspergillus│tubingensis提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 以淀粉為原料檸檬。培養(yǎng)基: CM0077生長(zhǎng)條件: 28-30℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
CD5分子樣蛋白(CD5L)ELISA試劑盒4-(Boc-氨基) 97%2-甲基丁硫 95%六硫鈷銨(>98%,BR)
CD5分子(CD5)ELISA試劑盒鈹標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml2-甲基-2-噻唑啉 97%草鈷(>99%,BR)
CD4分子(CD4)ELISA試劑盒2-溴-3-甲基吡啶-5- 95%4-甲基噻唑 99%萘鈷
CD45分子(CD45)ELISA試劑盒2-溴吡啶-5-頻哪酯 98%甲基基二硫 97%刀豆A(> 95%,BR)
CD44分子(CD44)ELISA試劑盒并呋喃-2- 98%烯基二硫 95%溴化亞銅(>98%,BR)
CD44變體6(CD44-v6)ELISA試劑盒2-氟-5-溴吡啶-3- 98% 2-吡基乙硫 98%無(wú)乙銅(>99%,BR)
CD40配體(CD40L)ELISA試劑盒N-Boc-5-溴吲哚-2- 95%3-甲基-2-丁硫 98%溴化銅(>99%,BR)
CD3分子(CD3)ELISA試劑盒5-基-2-氟 97%烯基基三硫 50%檸檬銅(>98.5%,BR)
CD34分子(CD34)ELISA試劑盒4-羧基 97%2-甲基-3-呋喃硫乙酯 80%氫氧化銅(>96.5%,Tech Grade)
CD30分子(CD30)ELISA試劑盒5--2-甲氧基 97%3-甲基-2-環(huán)己 98%草銅(>97%,Tech Grade)
CD22分子(CD22)ELISA試劑盒6-吡啶-3- 97%3-甲基-2-環(huán)戊烯-1-酮 97%無(wú)硫銅(>99%,BR)
CD209分子(CD209)ELISA試劑盒2-吡啶-3- 97%5H-5-甲基-6,7-二氫環(huán)戊基吡 98%肌酐;肌酐
CD19分子(CD19)ELISA試劑盒5--2-氟吡啶 99%反,反-2,4-壬二烯 >85.0%(GC)甲酚紫乙鹽(>70%,BS)
CD15分子(CD15)ELISA試劑盒3-羧基頻哪酯 97%1-辛烯-3- 98%性猩紅7B(>70%,BS)
CD14分子(CDl4)ELISA試劑盒4-羧基頻哪酯 97%2-戊基呋喃 ≥98%, FG性紅44(BS)
CD147分子(CD147)ELISA試劑盒2-甲氧基-3-吡啶-4- 95% 基(2-甲基-3-呋喃基)二硫 97%環(huán)胞甙鹽鹽;鹽環(huán)胞苷;安西他濱鹽鹽
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。