參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:牛腺病毒3型探針法熒光定量PCR試劑盒50次
產(chǎn)品貨號(hào):FS-P013491
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品分類:純化試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測(cè)過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè);樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
LCAT/FITC 熒光標(biāo)記卵磷?;D(zhuǎn)移抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
SREBP-1/FITC 熒光標(biāo)記調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh AHSG/Fetuin A/Alpha 2 HS Glycoprotein 胎球蛋白A 0.1ml
Rabbit Guinea pig IgM/AP 性磷(AP)標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM 0.1ml
Ghrelin 腦腸肽抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Goat IgM 兔抗羊IgM 1mg
SREBP-1/FITC 熒光標(biāo)記調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
PDXP(Human pyridoxal/pyridoxine vitamin B6-phosphatase) ELISA Kit 人吡哆/吡哆醇B6磷Multi-class antibodies: 48T
mucin 5B/Muc5B 粘蛋白-5B抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Influenza A virus (Duck) 鴨流感病毒抗體 0.2ml
Human SS-B/La Antibody ELISA Kit 人抗SS-B/La抗體 96T
PSCA 前列腺干細(xì)胞抗原抗體 0.1ml
CCDC74B 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白74B抗體 0.1ml
mucin 5B/Muc5B 粘蛋白-5B抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
Rabbit MG IgG/PE PE標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG 0.1ml
Guanylyl Cyclase alpha 2 鳥苷環(huán)化α2/GCS-α-2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh AQP2 通道蛋白-2抗體 0.1ml
IL-3/FITC (mouse, rat) 熒光標(biāo)記白介3抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Mink IgG/AP 性磷(AP)標(biāo)記的兔抗貂IgG 0.1ml
PPIG/FITC 熒光標(biāo)記親環(huán)蛋白(親環(huán))PPIG抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
牛腺病毒3型探針法熒光定量PCR試劑盒50次鏈霉菌種屬: Streptomyces│sp.分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0012生長(zhǎng)條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
胞內(nèi)分枝桿菌種屬: Mycobacterium│Mycobacterium intracellulare提供形式: 凍干物安全等級(jí): 3模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 研究生長(zhǎng)條件: 37存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
分枝桿菌種屬: Mycobacterium│Mycobacterium pyrenivorans提供形式: 凍干物安全等級(jí): 3模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 研究生長(zhǎng)條件: 28存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
鏈霉菌種屬: Streptomyces│sp.分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0012生長(zhǎng)條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
甲狀旁腺1-34(PTH 1-34)ELISA試劑盒鄰氨基 98%2-氟-3-甲氧基 97%十溴二
甲狀旁腺(PTH)ELISA試劑盒3,3-二基 99%2-氟-4- 96%氨基雜環(huán)鹽鹽
甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒1-二氫茚酮 99%2-氟-5-三氟 98%春雷霉;春日霉; 克死霉
甲酰甲硫氨(fMet)ELISA試劑盒二酰 97%2-氟-6-甲氧基 98%土拉霉A,托拉菌A,泰拉霉
甲肟前列腺D2(PGD2-MOX)ELISA試劑盒4-硝基肉桂 98%3-氟-4- 97%土拉霉A(標(biāo)準(zhǔn)品)
甲基化(Methylase)ELISA試劑盒二 98%4-氟 99%拉氧頭孢鈉
甲基化CpG結(jié)合蛋白2(MECP2)ELISA試劑盒3,4,5-氧基肉桂 99%2-氟-4-(三氟甲基) 97%原花青
喋呤(MTX)ELISA試劑盒二基(2,4,6-?;┭趸?97%3-羥 97%原花青(標(biāo)準(zhǔn)品)
己糖激3(HK3)ELISA試劑盒槲皮,二 97%2-羥基 97%胡椒
己糖激(HK)ELISA試劑盒槲皮 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98.5%3-羥基 97%胡椒(標(biāo)準(zhǔn)品)
幾丁質(zhì)3樣蛋白1(YKL-40/CHI3L1)ELISA試劑盒槲皮 97%4-異喹啉鹽鹽 98%紐莫康定B0(肺囊康定)
幾丁質(zhì)1(殼三糖)(CHIT1)ELISA試劑盒槲皮,二 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98% (HPLC)4-異基 98%福莫特羅
集落激因子(CSF)ELISA試劑盒L-鼠李糖,一 99%4-異氧基 98%溴甲后馬托品
集蛋白亞家族成員11(COLEC11)ELISA試劑盒二氧化硫脲 98%6-甲氧基-2-萘 97%乙阿比特龍酯
低密度脂蛋白受體(VLDLR)ELISA試劑盒4,5-二鄰二 98%4-甲氧基-2-三氟 96%溴莫尼定
低密度脂蛋白(VLDL)ELISA試劑盒甲酰肼 90%3-甲氧基羰基 97%磺草靈