組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對(duì)照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例) 1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對(duì)照。 2. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。 3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。 4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對(duì)照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。 5. 換槍頭,在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。 6. 換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。 7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。 | 二、樣品DNA的制備 8. 如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取, 多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽性對(duì)照), 一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)。 可以用10μL上步制備的PCR陽性對(duì)照的第4號(hào)(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬拷貝)或第5號(hào)(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。 9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒。 | 三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行) 10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于PCR陽性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。 11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照,并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加) |
實(shí)驗(yàn)外包:
1.基因組學(xué):基因芯片、SNP檢測(cè)、DNA甲基化檢測(cè)、生物信息學(xué)分析
2.轉(zhuǎn)錄組學(xué):microRNA芯片、LncRNA芯片、表達(dá)譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質(zhì)組學(xué):2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測(cè):DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質(zhì)檢測(cè):Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA
6.病理檢測(cè):HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細(xì)胞分選
7.代謝組學(xué):GC-MS、LC-MS、NMR
8.細(xì)胞及動(dòng)物模型:原代細(xì)胞、細(xì)胞模型、動(dòng)物模型構(gòu)建
p90RSK/FITC 熒光標(biāo)記絲/蘇激p90RSK蛋白抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
SRC3/KAT13B/AIB1/FITC 熒光標(biāo)記類固醇受體輔助活化因子-3抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh AHA3 AHA3抗體(擬南芥) 0.2ml
Rabbit Guinea pig IgM/PE PE標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM 0.1ml
GFAP 膠質(zhì)纖維性蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Goat IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗羊IgG 0.1ml
SRC3/KAT13B/AIB1/FITC 熒光標(biāo)記類固醇受體輔助活化因子-3抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
ANGPTL3(Human angiopoietin-like protein 3) ELISA Kit 人血管生成樣蛋白3Multi-class antibodies: 48T
phospho-P53 (Ser15) 磷化抑制基因P53抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rhesus antibody Rh HSP60 熱休克蛋白-60抗體 0.1ml
sVCAM-1 ELISA Kit 大鼠可溶性血管細(xì)胞粘附分子1 96T
PSAP 前列腺性磷抗體 0.1ml
CKLFH5 趨化樣因子超家族成員5抗體 0.2ml
phospho-P53 (Ser15) 磷化抑制基因P53抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rabbit MG IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗長爪沙鼠IgG 0.1ml
GPAA1 糖基磷脂酰肌醇錨連接蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh AQP4 通道蛋白-4抗體 0.1ml
IL-2R Gamma/FITC 熒光標(biāo)記白介2受體γ鏈抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Mink IgG/Bio 生物標(biāo)記的兔抗貂IgG 0.1ml
PPAR alpha/FITC 熒光標(biāo)記α型-過氧化活化增生受體抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
牛流行熱病毒RT-PCR試劑盒50次腸炎沙門氏菌種屬: Salmonella enteritidis提供形式: 西林瓶,定性菌片安全等級(jí): 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 研究;教學(xué);分類。培養(yǎng)基: 營養(yǎng)肉汁瓊脂:蛋白胨 5.0g,牛肉浸取物 3.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。生長條件: 37℃,好氧。生長特性: 革蘭氏陰性桿菌,大小為0.6-2.0μm × 1.0-4.0μm,通常以周生鞭毛運(yùn)動(dòng);兼性厭氧,營養(yǎng)要求不高;不能利用檸檬鹽作為碳源;產(chǎn)氣,大多數(shù)菌株不產(chǎn)生H2S,發(fā)酵阿拉伯糖而不發(fā)酵木糖,僅對(duì)人致病,能夠引起與傷寒類似的癥狀。存儲(chǔ)條件: -20℃避光保存;運(yùn)輸條件:冰袋運(yùn)輸。
食環(huán)氧化物交替赤種屬: Altererythrobacter│epoxidivorans分離基物: 沉積物/深海沉積物提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: yes應(yīng)用領(lǐng)域: 模式菌株培養(yǎng)基: 471生長條件: 35℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
鏈球菌種屬: Streptococcus│sp.提供形式: 凍干物安全等級(jí): 3模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: H Lancefield培養(yǎng)基: CM0109生長條件: 37℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
釀酒酵母種屬: Saccharomyces│cerevisiae分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 果酒和葡萄酒培養(yǎng)基: 77生長條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
基質(zhì)衍生因子1a(SDF1A)ELISA試劑盒甲基三辛基化銨(R=C8-C10) 90%2,4,6-三氟 96%千金藤
基質(zhì)裂解(ST3)ELISA試劑盒N-丁基溴化吡啶 99%2-(三氟甲基) 97%千金藤(標(biāo)準(zhǔn)品)
基質(zhì)裂解(ST2)ELISA試劑盒芐基三丁基化銨 98%4-三氟甲氧基 98%醋卡泊芬凈
基質(zhì)裂解(ST1)ELISA試劑盒1-丁基吡啶鹽鹽 98%3-(三氟甲氧基) 98%小白菊內(nèi)酯
基質(zhì)裂解蛋白/基質(zhì)溶(MAT)ELISA試劑盒芐基三丁基溴化銨 99%2-(三氟甲氧基) 97%小白菊內(nèi)酯
基質(zhì)金屬蛋白組織抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒芐基三基溴化膦 98%2,4,5-三溴咪唑 98%利扎曲坦
基質(zhì)金屬蛋白抑制因子4(TIMP-4)ELISA試劑盒丁基三基化膦 98%3,4,5-三氟 97%地瑞那韋乙鹽
基質(zhì)金屬蛋白抑制因子3(TIMP-3)ELISA試劑盒芐基基溴化銨 98%2,3,4-氧基 98%維拉佐酮
基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2(TIMP-2)ELISA試劑盒芐基基氫氧化銨 20%甲溶液2- 98%達(dá)比加群
基質(zhì)金屬蛋白抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒丁基三基溴化膦 99%3- 97%瑞
基質(zhì)金屬蛋白9/明膠B(MMP-9/Gelatinase B)ELISA試劑盒代十八 98%3,4,5-氧基 97%瑞(標(biāo)準(zhǔn)品)
基質(zhì)金屬蛋白9(MMP-9)ELISA試劑盒代十二 98%間三氟 97%D-阿拉伯糖
基質(zhì)金屬蛋白8/中性粒膠原(MMP-8)ELISA試劑盒十二基三基溴化膦 98%3-乙烯基 96%D-阿拉伯糖(標(biāo)準(zhǔn)品)
基質(zhì)金屬蛋白7(MMP-7)ELISA試劑盒1-乙基吡啶鹽鹽 98%4-乙烯基 96%阿魏,松柏,反式阿魏
基質(zhì)金屬蛋白5(MMP-5)ELISA試劑盒1-乙基吡啶氫鹽 99%二甲 CP,98%(二甲異構(gòu)體+乙基)阿魏(標(biāo)準(zhǔn)品)
基質(zhì)金屬蛋白4(MMP-4)ELISA試劑盒乙氧甲酰基乙基三基溴化膦 95%二 AR,99.0%安石榴苷
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1ml試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。