參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:腮腺炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒50次
產(chǎn)品貨號(hào):FS-P013547
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品分類:純化試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
Beta-lactoglobulin/FITC 熒光標(biāo)記β-乳球蛋白抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Socs 1/FITC 熒光標(biāo)記細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh AKR1D1 固酮還原家族1成員D1抗體 0.2ml
Rabbit horse IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗馬IgG 0.3ml
GABARAPL2 G1基丁A型受體相似蛋白2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Guinea pig IgG whole serum 兔抗豚鼠IgG抗血清 1ml
Socs 1/FITC 熒光標(biāo)記細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
1,3-DPG(Human 1,3-Disphosphoglycerate, ELISA Kit 人1,3-二磷甘油Multi-class antibodies: 48T
MK1/MAPKK1/MKK1 MK1/MAPKK1抗體(N-端)Multi-class antibodies: 0.1ml
Rhesus antibody Rh ITPR1 5-三磷肌醇受體1抗體 0.2ml
ECF ELISA Kit 大鼠嗜粒細(xì)胞趨化因子 96T
Proteasome 19S S5A 26S蛋白調(diào)節(jié)亞型S5a抗體 0.2ml
C22orf13 22號(hào)染色體開放閱讀框13抗體 0.2ml
MK1/MAPKK1/MKK1 MK1/MAPKK1抗體(N-端)Multi-class antibodies: 0.1ml
Donkey rabbit IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的驢抗兔IgG 0.1ml
GCC2 高爾基體卷曲螺旋蛋白2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ART4/CD297 二磷腺苷核糖基轉(zhuǎn)移4抗體 0.2ml
Icos/CD278/FITC 熒光標(biāo)記誘導(dǎo)協(xié)同刺激分子CD278抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Monkey IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗猴IgG 0.1ml
p-PKC/FITC 熒光標(biāo)記磷化蛋白激C抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
腮腺炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒50次變形桿菌種屬: Proteus│sp.提供形式: 凍干物安全等級(jí): 3模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: Kauffmann血清型 21a 1abc培養(yǎng)基: CM0051生長條件: 37℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
金色鏈霉菌種屬: Streptomyces│aureus提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 12生長條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
纖維鏈霉菌種屬: Streptomyces│cellulosae提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0012生長條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
蘇云金芽胞桿菌種屬: Bacillus│thuringiensis分離基物: 1-5cm土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 科研研究培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;礦物油法
八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2A)ELISA試劑盒乙酮 CP,98%硬脂鎘 AR咔唑(>95%,BR)
艾杜糖硫酯(IDS)ELISA試劑盒乙酮 GR,≥99.0% (GC)硫化亞鐵 Fe,60.0 - 72.0 %香柏油
癌癥促凝(CP)ELISA試劑盒異佛爾酮二 99%硬酯鉛 AR硝鈰六
癌胚鐵蛋白(CEF)ELISA試劑盒乙酰乙基烯乙酯 95% Standard for GC硫鈰八(>97%,BR)
癌胚抗原(CEA/CD66)ELISA試劑盒烯酰 AR,99.0%化鎳 CP,98.0% 三氧化二鉻(>99%,BR)
癌抗原27-29(CA 27-29)ELISA試劑盒己二二酰肼 98%化鎳 anhydrous, 99.99% metals basis四氧化三鈷(>99%,BR)
癌蛋白誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄物3(OIT3)ELISA試劑盒正丁 AR,98.5%肼 AR,98.0%乙鈷四(>99.5%,BR)
阿米巴(Amebiasis)ELISA試劑盒1,4-丁二 99%苦酮 AR鈷粉(>99%,BR)
阿立新A(Orexin A)ELISA試劑盒二乙二丁 99% CP,99.0%(劇品)銅粉(>99.5%,BR)
阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)ELISA試劑盒二乙二丁 CP GR,99.8%式碳銅(銅純度:52.5~56.5%)
阿黑皮原(POMC)ELISA試劑盒1,3-丁二 99% 99.995%氧化銅粉(>99%,BR)
吖啶橙(AO)ELISA試劑盒1,3-丁二 分析標(biāo)準(zhǔn)品玫瑰紅 Indicator焦銅
ω干擾(IFN-ω/IFNB)ELISA試劑盒1,3-丁二 98%過氧化鈉 95%銅三(>98%,BR)
κB抑制蛋白激(IKK)ELISA試劑盒基硅 Wacker quality, ≥99.0% (GC)高鈉 ACS, 99.8-100.3% 2'-脫氧腺苷5'二三鈉鹽(>97%,BR)
γ肽(Pγ)ELISA試劑盒二酮 ≥99.0%(GC)亞硝鈷鈉 AR,Co 13.5~14.5%2'-脫氧胞苷-5'-二三鈉鹽(分子生物學(xué)級(jí))
γ谷氨酰轉(zhuǎn)移(GGT)ELISA試劑盒正十二硫 98%偏鋁鈉 AR(>98%,BR)