詳細介紹
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:質(zhì)粒PET32a 2μg
產(chǎn)品貨號:FS-P013341
產(chǎn)品規(guī)格:2μg
產(chǎn)品分類:純化試劑盒
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
實驗過程:
一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 |
注意事項
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個檢測過程應(yīng)嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,各區(qū)實驗服、儀器、耗材應(yīng)獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū),并單獨存放。
6.為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標記。
7.儀器擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置;不同批號試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9.實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進行無害化處理后方可丟棄。
MAFbx/Fbx32/Atrogin-1/FITC 熒光標記泛蛋白連接抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
TEM 1/CD248/FITC 熒光標記內(nèi)涎蛋白/內(nèi)皮唾液蛋白抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ADAMTS7(NT) 整合樣金屬蛋白與1型-7抗體 (N端抗體) 0.1ml
Rabbit chicken IgM/FITC FITC標記的兔抗雞IgM 0.3ml
GNAT3 G蛋白轉(zhuǎn)錄因子α3抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit chicken IgG whole serum 兔抗雞IgG抗血清 1ml
TEM 1/CD248/FITC 熒光標記內(nèi)涎蛋白/內(nèi)皮唾液蛋白抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
AIRA(Human insulin receptor antibody) ELISA Kit 人抗胰島受體抗體Multi-class antibodies: 48T
IKB alpha 核因子κB抑制蛋白α抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MAGEB3 黑色瘤相關(guān)抗原B3抗體 0.2ml
BMP-7(Human Bone morphogenetic protein 7) ELISA Kit 人骨成型蛋白7 96T
RANK 核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB受體抗體(核因子kB受體活化因子) 0.1ml
Phospho-CK17 (Ser44) 磷化細胞角蛋白17抗體 0.1ml
IKB alpha 核因子κB抑制蛋白α抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rabbit mouse IgG-Fc/Cy5.5 Cy5.5標記的兔抗小鼠IgG-Fc 0.1ml
GOLPH4 高爾基體膜蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh AMPK gamma 3/PRKAG3 腺苷活化蛋白激γ3抗體 0.2ml
Integrin- Alpha 4/FITC 熒光標記整合α4抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit horse IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標記的兔抗馬IgG 0.1ml
Shh/FITC 熒光標記Shh信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路膜蛋白受體抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
質(zhì)粒PET32a 2μg人分泌型ST2(sST2)elisa檢測試劑盒
人S100鈣結(jié)合蛋白P(S100P)elisa檢測試劑盒
人前列腺E受體3(EP3)elisa檢測試劑盒
人血小板衍生生長因子亞基A(PDGFA)elisa檢測試劑盒
人功能相關(guān)抗原1(LFA-1)elisa檢測試劑盒
人硫氧還蛋白結(jié)合蛋白2(TBP2)elisa檢測試劑盒
人通用轉(zhuǎn)錄因子II B(GTF2B)elisa檢測試劑盒
人凝集樣氧化低密度脂蛋白受體1(LOX-1)elisa檢測試劑盒
人轉(zhuǎn)化生長因子β蛋白22(TSC22)elisa檢測試劑盒
人磷化外信號調(diào)節(jié)(pERK)elisa檢測試劑盒
人鳥脫羧(ODC)elisa檢測試劑盒
人Persephin蛋白(PSPN)elisa檢測試劑盒
人功能相關(guān)抗原2(LFA-2/CD2)elisa檢測試劑盒
人通用轉(zhuǎn)錄復(fù)合體(GTC)elisa檢測試劑盒
人胸腺基質(zhì)生成(TSLP)elisa檢測試劑盒
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。