化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：狼源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品貨號：FS-P013351
產(chǎn)品規(guī)格： 50次
產(chǎn)品分類：純化試劑盒
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
實驗過程：
一、試劑準備 1. DNA模板 2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 |
注意事項
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應全部轉移至標本準備區(qū)，并單獨存放。
6.為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7.儀器擴增相關參數(shù)應按照本說明書相關要求進行設置；不同批號試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
M2-PK /FITC 熒光標記丙酮激-M2抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
TCF7L2/FITC 熒光標記轉錄因子7類似物2抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh ADAR1 (C-terminus) 雙鏈RNA腺苷脫氨基抗體(C端) 0.2ml
Rabbit chicken IgM/PE-Cy3 PE-Cy3標記的兔抗雞IgM 0.1ml
GASC1 鱗狀細胞癌增強蛋白1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Rabbit chicken IgG/Bio 生物標記的兔抗雞IgG 0.1ml
TCF7L2/FITC 熒光標記轉錄因子7類似物2抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Human H-ras ELISA Kit 人H-rasMulti-class antibodies： 48T
Phospho-Histone H3 (Ser10) 磷化組蛋白3抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Rhesus antibody Rh Methionine adenosyltransferase 蛋腺苷轉移抗體 0.2ml
PAL(Human L-Phenylalanine ammonla-lyase) ELISA Kit 人L丙解 96T
RALDH2 視黃脫氫2型抗體 0.1ml
C6orf106 6號染色體開放閱讀框106抗體 0.2ml
Phospho-Histone H3 (Ser10) 磷化組蛋白3抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Rabbit Monkey IgG/Cy3 Cy3標記的兔抗猴IgG 0.1ml
GARNL3 GARNL3蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Angiotensin I/Angiotensinogen 血管緊張I抗體 0.2ml
phospho-IRS1(Ser636/639) /FITC 熒光標記磷化胰島受體底物-1抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit horse IgM/Cy3 Cy3標記的兔抗馬IgM 0.1ml
sFRP/FITC 熒光標記抗內(nèi)膜抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
狼源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒人白三烯A4解（LTA4H）elisa檢測試劑盒
人肌腱蛋白R（TNR）elisa檢測試劑盒
人抗肝特異性脂蛋白（LSP）elisa檢測試劑盒
人5-甲基氫葉高半胱甲基轉移（MTR）elisa檢測試劑盒
人β-黑色（βMSH）elisa檢測試劑盒
人谷胱甘肽S轉移α4（GSTα4）elisa檢測試劑盒
人滑行蛋白α（TXLNa）elisa檢測試劑盒
人跨膜絲蛋白2（TMPRSS2）elisa檢測試劑盒
人甲肟前列腺D2（PGD2-MOX）elisa檢測試劑盒
人肌鈣蛋白C2 （TNNC2）elisa檢測試劑盒
人彈性蛋白2B（ELA2B）elisa檢測試劑盒
人丙羥化 （PAH）elisa檢測試劑盒
人肌漿球蛋白（MYO）elisa檢測試劑盒
人基質(zhì)金屬蛋白3（MMP-3）elisa檢測試劑盒
人白球蛋白樣受體亞家族B成員2（LILRB2）elisa檢測試劑盒
化工儀器網(wǎng)