JC-1線粒體膜電位熒光探針染色步驟（流式細胞儀法）：

1. 于6-，12或24-孔板上進行細胞鋪板，密度為5×105 cells/mL。37℃，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。選擇合適的化合物根據(jù)特定的步驟進行凋亡誘導(dǎo)。 注：進行凋亡誘導(dǎo)時的細胞密度建議不超過1×106 cells/mL，也可根據(jù)自己的細胞類型培養(yǎng)至合適的密度。

2. 取0.5 mL細胞懸液至無菌的離心管內(nèi)；

3. 室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清。

4. 用0.5 mL JC-1工作液重懸細胞，于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱孵育15-30 min；注意：一般情況，15 min足以進行充分的染色。

5. 室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清；

6. 用2 mL細胞培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細胞，之后室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清；

7. 重復(fù)步驟6）；

8. 用0.5 mL新鮮培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細胞，即可進行后續(xù)的流式分析。注意：請馬上進行流式定量分析，此細節(jié)很重要。

數(shù)據(jù)分析：含有紅色JC-1聚集物的健康細胞線粒體用FL2通道檢測；含有綠色JC-1單體的凋亡或不健康細胞用FL1（FITC）通道檢測。